Preparação de amostra e master mix para medição do comprimento dos telômeros usando PCR quantitativo multiplex monocromático (MMqPCR)

Comece adicionando amostras de DNA genômico extraídas de células mononucleares do sangue periférico às tiras de PCR A, B e C, respectivamente. Em seguida, vórtice a alíquota de DNA controlada descongelada por 30 segundos. Depois de centrifugar brevemente o tubo, aspire o volume total no primeiro tubo na tira de tubo PCR de curva padrão.

Em seguida, adicione 70 microlitros de água de grau PCR no segundo através de oito tubos da tira de PCR de curva padrão. Em seguida, ressuspenda o DNA de controle no primeiro tubo e aspire 70 microlitros no segundo tubo. Aguarde 30 segundos e ressuspenda a solução no segundo tubo.

Colete os reagentes da mistura principal e deixe-os atingir a temperatura ambiente na capa de PCR. Em seguida, adicione um microlitro da alíquota verde cibernética à alíquota do buffer. Vortex todas as alíquotas por 10 segundos e centrifugue-as por cinco segundos.

Em seguida, adicione as quantidades especificadas de todos os reagentes e primers da mistura principal no tubo de betaína de cinco mililitros. Depois de retirar a DNA polimerase de menos 20 graus Celsius, vórtice por 10 segundos e depois centrifugue por cinco segundos. Depois de centrifugado, adicione lentamente 128 microlitros à mistura principal.

Vortex o tubo master mix de cinco mililitros por 30 segundos e depois reserve.