Para começar, recupere o frasco criogênico com células de nitrogênio líquido e descongele-o em banho-maria a 37 graus Celsius por dois minutos. Depois de transferir as células descongeladas para um tubo de 15 mililitros, adicione gradualmente 10 mililitros de meio pré-aquecido e centrifugue o tubo. Descarte o sobrenadante e ressuspenda as células em um mililitro de DPBS suplementado contendo FBS e cloreto de cálcio.
Em seguida, misture um mililitro da suspensão celular com 50 microlitros cada um do coquetel de remoção de células mortas e coquetel de seleção de biotina em um tubo de fundo redondo de poliestireno de cinco mililitros e incuba. Após o vórtice, adicione 100 microlitros de grânulos de dextrano à suspensão celular e misture delicadamente duas vezes com a pipeta. Em seguida, adicione 1,3 mililitros de DPBS suplementado à mistura e incube com um ímã por três minutos em temperatura ambiente.
Inverta o ímã e o tubo para despejar a suspensão de célula viva em um novo tubo cônico de 15 mililitros. Impellet as células em uma centrífuga. Depois de remover a maior parte do sobrenadante, ressuspenda as células em um mililitro de DPBS contendo 0,04% de albumina sérica bovina.
