Para começar, obtenha uma suspensão de células derivadas de iPSC viva enriquecida em um tubo cônico e centrifugue-a a 460 g por cinco minutos a quatro graus Celsius. Depois de descartar o sobrenadante, adicione 100 microlitros de tampão de lise a frio 0,5X recém-preparado. Usando um P100, pipete para cima e para baixo 10 vezes para misturar as células e incubar o tubo no gelo por três minutos.
Em seguida, adicione 500 microlitros de tampão de lavagem resfriado ao lisado, centrifugue o tubo e descarte o sobrenadante. Depois de repetir a lavagem, ressuspenda o pellet em 120 microlitros de tampão de núcleo diluído resfriado. Usando um filtro de célula de 40 micrômetros, filtre a suspensão celular e adicione 0,4% de azul de tripano ao filtrado.
Finalmente, avalie a qualidade dos núcleos isolados ao microscópio. Usando esta técnica, núcleos de alta qualidade foram isolados de células progenitoras hematopoiéticas derivadas de iPSC humanas criopreservadas.
