Transformação em larga escala de plasmídeos UAS-cDNA/ORF de montagem modular baseada em CRISPR em E. coli

Para transformar os produtos de plasmídeos UAS cDNA/ORF obtidos da montagem modular baseada em CRISPR em Escherichia coli, pré-resfrie pontas de 10 microlitros a quatro graus Celsius. Além disso, pré-resfrie os tubos de 1,5 mililitro em um bloco de resfriamento de alumínio no gelo. Depois de descongelar células competentes de E.coli no gelo por cinco minutos, adicione uma alíquota de 10 microlitros das células a cada tubo pré-resfriado de 1,5 mililitro.

Em seguida, adicione um microlitro dos produtos de plasmídeo UAS cDNA/ORF a cada tubo contendo 10 microlitros de células competentes. Agite o tubo suavemente para misturar e coloque-o no gelo por 30 minutos. Incube os tubos a 42 graus Celsius em banho-maria por um minuto.

Em seguida, leve imediatamente à geladeira por dois minutos. Adicione 100 microlitros de meio SOC, pré-aquecido a 37 graus Celsius, a cada tubo à temperatura ambiente e incube os tubos em uma incubadora agitada a 250 RPM e 37 graus Celsius por uma hora. Em seguida, aqueça as placas LB contendo um antibiótico correspondente ao gene de resistência a antibióticos do módulo UAS a 37 graus Celsius.

Espalhe as células nas placas quentes e incube-as a 37 graus Celsius durante a noite.