Para começar, pegue um fio de sutura de seda trançado e separe-o em um único filamento. Use duas pinças Dumont 5 com pontas micro embotadas e pinças para fazer um laço duplo ao redor da ponta da outra pinça. Com a pinça em loop, pegue a ponta solta da sutura e puxe-a cuidadosamente pelas duas alças.
Empregue uma tesoura de mola vannas para aparar o excesso de suturas de ambos os lados. Depois de decapitar o rato sacrificado, faça um corte longitudinal ao longo da linha média da parede abdominal. Em seguida, exteriorize o mesentério.
Corte a conexão logo abaixo do esfíncter pilórico, aproximadamente dois a três centímetros acima do ceco, bem como a conexão com o reto. Em seguida, enxágue os mesentérios inteiros dissecados em 200 mililitros de solução salina fisiológica gelada. Em seguida, transfira e prenda-os em uma placa de Petri revestida de silicone contendo uma solução salina fisiológica gelada.
Usando um microscópio estereoscópico, pinça fina de inox Dumont 5 e tesoura de mola vannas, dissecar os vasos linfáticos mesentéricos de segunda ordem da gordura circundante e do tecido conjuntivo. Agora, transfira o vaso linfático dissecado para a câmara de profusão do vaso para canulação em cânulas de vidro. Deslize um único nó bonito em cada cânula de vidro em preparação para prender o recipiente nas cânulas posteriormente.
Usando um pequeno pedaço de gordura, oriente a direção do vaso linfático e canule a extremidade distal em P1. Deslize o nó pela cânula e aperte-o para prender o vaso linfático. Em seguida, pressurize o vaso linfático para fortificar milímetros de mercúrio na câmara de perfusão. Coloque uma pedra borbulhante com 7% de dióxido de carbono e 93% de oxigênio na câmara do banho para manter o pH fisiológico.
Conecte a câmara ao regulador de temperatura e ajuste-a para 37 graus Celsius.
