Para começar, o digesto homogeneizado de frango é colhido de um intestino de frango extraído em um vórtice por 10 a 15 segundos. Transferir a amostra homogeneizada para o tubo que contém o meio de enriquecimento. Após a incubação, use um misturador de vórtice para misturar bem o tubo enriquecido por 10 a 15 segundos.
Em seguida, transfira a amostra misturada para um meio de caldo mínimo estéril antes de incubar como antes. Em seguida, dilua em série as amostras em solução salina estéril, começando com uma diluição de um a 10 e continuando até uma diluição de 1 a 1000. Homogeneizar bem a amostra num misturador de vórtices após cada diluição.
Transferir um mililitro da amostra diluída para uma placa de Petri em condições estéreis e anaeróbias. Em seguida, despeje 15 a 20 mililitros de meio de ágar mínimo derretido na placa de Petri. Agite o prato suavemente para garantir uma mistura uniforme.
Quando o ágar-ágar estiver solidificado, incubar as placas em posição invertida em uma estação anaeróbica por 24 horas. a 39 graus Celsius. As colônias devem aparecer como pequenos pontos distintos e embutidos no final da incubação.
Agora use um loop de inoculação estéril para escolher cuidadosamente cada colônia bacteriana individual. Transfira as colônias para tubos separados contendo cinco mililitros de meio de caldo mínimo. O aumento da turbidez do final da incubação é indicativo de crescimento bacteriano.
Colônias bacterianas capazes de utilizar mio-inositol foram observadas em meio de ágar mínimo.
