Para começar, coloque um camundongo anestesiado em uma nova cortina cirúrgica. Aplique pomada oftálmica no olho do animal para evitar o ressecamento e, em seguida, injete Metacam, seguido de 0,5 mililitros de solução salina por via subcutânea no camundongo. Raspe o pescoço do camundongo na base do osso occipital e limpe a superfície com PBS estéril.
Transfira o mouse para o quadro estereotáxico na posição de bruços. Coloque a barra nasal da estrutura estereotáxica na parte superior do mouse para fornecer estabilidade e certifique-se de que os dentes superiores estejam presos. Posicione a cabeça do animal em um ângulo de 120 graus em relação ao corpo para elevar e distender a nuca.
Em seguida, usando gaze estéril, limpe o local cirúrgico três vezes com esfoliante Betadine e etanol 70%. Em seguida, limpe uma vez com a solução de Betadine. Usando um bisturi, faça uma pequena incisão de um centímetro.
Passe cuidadosamente o bisturi ao longo da linha média para cortar os músculos. Usando uma pinça, afaste suavemente os músculos para a esquerda e para a direita. Em seguida, carregue a seringa Hamilton com 2,5 microlitros de elastase, evitando bolhas de ar.
Insira lentamente a seringa com o chanfro voltado para cima no centro da cisterna magna. Após a punção, retire cuidadosamente o chanfro para facilitar a liberação de uma pequena quantidade de líquido cefalorraquidiano ou LCR. Em seguida, reinsira o chanfro no local da punção e injete lentamente elastase ou veículo na cisterna magna, deixando a agulha no lugar por um minuto para evitar vazamento de elastase.
Após remover o chanfro, feche o local da incisão com uma sutura cirúrgica não absorvível e desligue o anestésico. Remova o animal da estrutura estereotáxica e coloque-o em uma almofada térmica de 37 graus Celsius até que o mouse se recupere.
