Para começar, recupere a placa contendo inserções de cultura de células com monocamadas 2D derivadas de organoides da incubadora. Remover os meios de cultura em monocamada das câmaras apicais e basolaterais das inserções de cultura de células a avaliar. Lave suavemente as câmaras apicais e basais duas vezes com 200 e 500 microlitros de PBS pré-aquecido.
Remova a solução de lavagem da câmara apical e aplique 200 microlitros de 0,5 miligramas por mililitro de quatro quilodalton traçador FITC-dextrano em PBS na câmara apical do inserto de cultura de células. Incube a placa em uma incubadora umidificada a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono por 20 minutos. Em seguida, amostre 50 microlitros da câmara basolateral da placa incubada de 24 poços e transfira-a para uma placa de 96 poços compatível com um leitor de microplacas.
Substitua 50 microlitros de PBS fresco na câmara basolateral do poço amostrado. Usando um leitor de microplacas pré-calibrado, meça imediatamente a intensidade de fluorescência em um comprimento de onda de excitação de 495 nanômetros e um comprimento de onda de emissão de 535 nanômetros.
