Após a execução do LCMS de extratos de raízes de plantas, examine o cromatograma de íons totais das varreduras Q1 e Q3, incluindo a varredura de íons do produto dependente de dados. Observe a massa original de íons abundantes com características semelhantes a alcalóides tropanos, incluindo uma massa abaixo de 500 Daltons para o íon carregado positivamente, normalmente, um número par. Tempos de retenção entre dois a 22 minutos e fragmentos que correspondem a valores de carga mestre consistentes com alcalóides tropanos.
Examine o cromatograma ou canal de varredura de íons precursores especificamente para carga mestre 124 e determine quais picos ou íons em quais tempos de retenção produzem esse fragmento específico. Clique varredura por varredura, através do cromatograma e revise os espectros completos de MS-MS da varredura de íons do produto dependente de dados, especialmente para espécies menos abundantes. Em seguida, analise os cromatogramas de varredura de íons precursores juntos para carga mestre 122 e 140, que indicam alcalóides tropanos dissubstituídos, e cargas mestras 138 e 156, indicativas de alcalóides tropânicos trissubstituídos.
Examinar o cromatograma ou os canais de varrimento de perda neutra para a carga principal 160 e 166. Identifique quais picos ou íons produzem perdas neutras e observe seus tempos de retenção. Clique varredura por varredura através do cromatograma e compare com a fragmentação de varredura de íons do produto dependente de dados, especialmente para espécies menos abundantes.
Use a combinação de dados de varredura de íons precursores e varredura de perda neutra, suportados por resultados de varredura de íons de produtos dependentes de dados, para fazer anotações putativas dos alcalóides observados. Comece com a menor massa de tropano, depois adicione a perda neutra e contabilize qualquer massa restante. Compare as anotações de alcalóides com as relatadas na literatura para determinar o padrão de substituição de alcalóides tropanos.
Além disso, use padrões comercialmente disponíveis de alcalóides comuns do tropano para confirmação. O cromatograma de varredura Q1 completo do extrato de raiz de Datura metel revelou diversos alcalóides tropanos com abundâncias variadas. As características da carga mestre 124, 122, 140, 138 e 156 indicaram a presença de alcalóides tropanos.
Muitos desses alcalóides tropanos foram acetilados, tiglolados ou derivados do ácido fenalático ou trópico, como evidenciado pelos sinais nos cromatogramas de varredura de perda neutra. A utilização de dados espectrais permitiu a anotação de alcalóides específicos, notadamente identificando um composto com massa aparente de carga mestra 224. O método permitiu a dedução de uma estrutura composta por meio de seu padrão de fragmentação e perda neutra, confirmando a presença de grupos tigloyl como substituições.
O exame de um extrato aquoso de metanol de sementes de Datura stramonium produziu um cromatograma de pico de base de varredura Q1 completo, identificando um alcalóide tropano monossubstituído altamente abundante, provavelmente hiosciamina. O espectro MS-MS de alta resolução também permite a identificação de novos alcalóides a partir de sementes de Datura stramonium.
