Para começar, use um extrator de pipeta para esticar um capilar de vidro de 20 micrômetros de largura. Coloque um útero de camundongo extraído em uma toalha de papel seca. Em seguida, insira a ponta de uma tesoura fina no lado miometrial do útero e passe lentamente a ponta da lâmina por todo o comprimento e corte-a.
Agora, exponha e corte o decidui. Transfira-os para um prato com meio de crescimento. Dissecar o decíduo para extrair os embriões.
Transfira os embriões para uma placa de Petri de 60 milímetros contendo meio de crescimento quente. Com uma pinça fina, corte cuidadosamente a cauda e a cabeça do embrião e deixe apenas o tronco do corpo. Remova cuidadosamente o máximo de tecido possível do tronco sem danificar o coração ou as artérias pulmonares e aorta.
Insira uma nova agulha esticada na ponta da pipeta bucal e aspire e carregue cuidadosamente 10 microlitros de uma mistura de plasmídeo preparada na agulha esticada. Coloque um único coração em uma placa de Petri limpa de 60 milímetros contendo PBS pré-aquecido. Coloque o prato sob um microscópio de dissecação.
Ajuste a distância entre os pólos dos eletrodos positivo e negativo para cerca de quatro milímetros. Em seguida, use uma pipeta de agulha na boca para perfurar suavemente a camada mais superficial do coração. Transfira um a dois microlitros da mistura de plasmídeo para o coração.
Remova a agulha com cuidado. Segure o eletrodo no lugar de forma que o coração fique localizado entre os dois pólos. Em seguida, eletropore o coração.
Transfira o coração eletroporado para uma nova placa de 12 poços, contendo um mililitro de meio de crescimento. Incube a placa a 37 graus Celsius sob 5% de dióxido de carbono até a análise.
