Para começar, coloque o rato em decúbito dorsal anestesiado no campo cirúrgico. Aplique i-gel e prenda o cone do nariz com fita cirúrgica. Em seguida, prenda as patas dianteiras e traseiras do mouse com fita cirúrgica.
Examine a parte inferior do abdômen do camundongo em busca da bexiga. Para ajudar a criar espaço dentro do abdômen durante a cirurgia, induza a micção aplicando suavemente pressão externa na bexiga entre o polegar, o indicador e o dedo médio. Use um pedaço de gaze para absorver a urina.
Desinfete o abdômen com iodo ou um esfoliante à base de clorexidina, começando do centro e trabalhando para fora em movimentos circulares. Em seguida, repita três vezes com álcool a 70%. Faça uma pinça do dedo do pé para confirmar a profundidade da anestesia.
Em seguida, coloque uma cortina cirúrgica sobre o mouse com a abertura diretamente sobre o abdômen preparado cirurgicamente. Troque as luvas por luvas estéreis. Use um bisturi para fazer uma incisão abdominal na linha média de aproximadamente 2-3 centímetros de comprimento.
Levante os músculos retos com uma pinça para identificar a linha alba translúcida. Use uma tesoura para entrar na cavidade abdominal através da linha alba. Em seguida, estenda-se ao longo da linha alba proximal e distalmente.
Umedeça uma tira de gaze e dois cotonetes com soro fisiológico morno. Crie um rolo abdominal rolando firmemente uma extremidade da gaze até a metade, deixando uma cauda generosa. Usando um afastador de pele, retraia a parede abdominal direita.
Com a ajuda de cotonetes umedecidos, execute uma rotação visceral medial direita varrendo suavemente os intestinos delgado e grosso para o quadrante superior esquerdo para visualizar a aorta e a veia cava inferior. Depois de retrair o intestino para fora da vista, coloque a ponta enrolada da gaze embaixo do intestino. Em seguida, traga a cauda ao redor e para fora do corpo para envolver suavemente o intestino.
Aplique uma tensão suave na cauda da gaze para manter o intestino fora do campo de visão. Ajuste o rolo abdominal e o afastador de pele para obter uma visão ideal dos órgãos retroperitoneais. Depois de confirmar que a veia cava inferior e a aorta infrarrenal estão totalmente visíveis, exponha a aorta entrando e dividindo a fáscia retroperitoneal.
Identifique as artérias gonadais que correm paralelas ao longo da aorta infrarrenal anterior. Usando uma pinça, divida a fáscia entre as artérias gonadais e continue longitudinalmente para expor a aorta anteriormente. Agora, com pontas de fórceps, espalhe suavemente as fibras do tecido conjuntivo entre a aorta e a veia cava inferior e continue trabalhando circunferencialmente ao redor da aorta nesse nível.
Continue dissecando sem corte o plano entre a aorta e a veia cava inferior, trabalhando caudalmente em direção à bifurcação aórtica. Uma vez que a borda direita da aorta esteja separada da veia cava inferior, retorne proximalmente ao nível da veia renal esquerda. Disseque a fáscia retroperitoneal da borda lateral esquerda da aorta, trabalhando circunferencialmente ao redor até que a aorta esteja totalmente isolada.
Depois de examinar a aorta isolada, coloque uma tira de luvas ao longo das bordas direita e esquerda da aorta. Usando paquímetros portáteis estéreis, meça o diâmetro aórtico mais largo. Enxugue qualquer sangue ou fluido extra da aorta com um cotonete com ponta de algodão.
Coloque um pedaço de gaze seca de 10 x 2 milímetros em cima da aorta. Usando uma pipeta, adicione 5 microlitros de elastase para saturar a gaze e a aorta. Dobre suavemente os pedaços da luva ao redor da aorta por 5 minutos.
Após 5 minutos, reinicie as retrações intestinais e desdobre os pedaços da luva. Irrigue a cavidade abdominal com 1 mililitro de solução salina morna a 0,9% estéril, removendo cuidadosamente a gaze e os pedaços de luvas da aorta. Absorva a solução salina no abdômen com gaze.
Usando paquímetros portáteis, meça novamente a aplicação de pós-elastase de diâmetro aórtico mais largo. Remova cuidadosamente o rolo abdominal de baixo do intestino e para fora do corpo. Observe para se certificar de que o intestino parece rosa e adequadamente perfundido.
Aproxime novamente a fáscia abdominal usando uma sutura de monofilamento não absorvível 5-0. Feche a pele com 3-4 grampos de pele. Camundongos machos tratados com elastase demonstraram um aumento de 43,4% no diâmetro da aorta após 5 minutos de exposição em comparação com os diâmetros aórticos basais não tratados, enquanto as aortas fêmeas tratadas aumentaram 33,6% Os camundongos simulados não exibiram relativamente nenhuma alteração no diâmetro da aorta.
Dos camundongos tratados com fêmeas, três dos seis morreram de ruptura de AAA, enquanto nenhuma ruptura de AAA foi observada entre os machos tratados. Aos 28 dias, o diâmetro médio do AAA dos machos tratados foi de aproximadamente 2,86 milímetros, com uma variação percentual média de 257. Enquanto os diâmetros AAA de camundongos fêmeas tratados sobreviventes foram de 3,6 milímetros, com uma variação percentual média de 417.
Os camundongos simulados não exibiram relativamente nenhuma alteração nos diâmetros da aorta.
