Para começar, obtenha embriões de camundongos recém-acasalados. Prepare 12 microgotículas de meio otimizado para potássio simples no fundo de uma placa de Petri de 35 milímetros. Cubra as microgotículas com três a cinco mililitros de óleo mineral e coloque as placas de Petri em uma incubadora a 37 graus Celsius com 5% de dióxido de carbono para equilibrar.
Usando uma pipeta de transferência, transfira os embriões de camundongo do meio M2 para o meio KSOM. Coloque os embriões lavados nas microgotículas KSOM preparadas e incube-os a 37 graus Celsius com 5% de dióxido de carbono por quatro dias. Selecione blastocistos vantajosos de acordo com seu tamanho, massa celular interna, número de células trofoblásticas e grau de expansão.
Adicione um mililitro de gelatina a 2% a uma placa de cultura de 12 poços e incube a 37 graus Celsius por 30 minutos. Em seguida, aspire o excesso de gelatina e deixe o fundo do prato secar completamente. Semeie células de adenocarcinoma endometrial humano ou células de Ishikawa na placa de 12 poços revestida de gelatina e incube a placa por 24 horas.
Coloque delicadamente de cinco a 15 blastocistos frescos em cada poço da placa de 12 poços que contém as células. Após 48 horas, observe os embriões ao microscópio para avaliar seu status de fixação após mover a placa três vezes. Embriões soltos flutuam ou rolam sobre a superfície das células.
Finalmente, calcule a taxa de implantação do embrião na presença de várias concentrações de estrogênio. Os resultados demonstraram que as concentrações fisiológicas próximas de 17 beta-estradiol aumentaram as taxas de implantação embrionária em comparação com o controle sem 17 beta-estradiol. No entanto, concentrações ultra-altas de 17 beta-estradiol em torno de 100 nanomolares reduziram significativamente as taxas de implantação embrionária.
