Para realizar a passagem de neuroesferas obtidas de células-tronco neuro isoladas da zona subventricular dos neurônios, colete o meio contendo as neuroesferas das placas de vários poços e transfira-as para um tubo de centrífuga de 15 mililitros. Centrifugue as neuroesferas por cinco minutos a 300 G. Depois de remover o sobrenadante, adicione 200 microlitros de solução enzimática ao pellet e bata suavemente no fundo do tubo para desalojá-lo. Incube por 10 minutos em temperatura ambiente para facilitar a dissociação da neuroesfera.
Em seguida, adicione um mililitro de meio de controle para interromper a reação enzimática. Dissocie mecanicamente as neuroesferas com uma micropipeta P 1000 pipetando para cima e para baixo de 10 a 20 vezes. Adicione um volume adicional de quatro mililitros de meio de controle e misture por inversão para lavar as células.
Centrifugar as células durante cinco minutos a 300 G antes de retirar o sobrenadante. Adicione um mililitro de meio completo e ressuspenda o pellet para homogeneizar a suspensão celular pipetando para cima e para baixo 10 vezes. Depois de diluir uma parte de uma alíquota da suspensão celular com uma parte de azul de tripano, contar a suspensão celular com uma câmara de Neubauer.
Para expandir a cultura, semeie células a uma densidade de 10.000 células por centímetro quadrado usando meio completo em uma placa de cultura ou frasco apropriado.
