Para começar, fixe o suporte cantilever de um AFM no suporte de troca cantilever. Use uma pinça de relojoeiro para montar o cantilever selecionado no suporte. Aperte o parafuso no suporte para prender o cantilever.
Coloque e trave o suporte cantilever na cabeça do AFM que está apoiada no suporte. Use a função do motor de etapa no software do AFM para retirar a cabeça do AFM ao ponto o mais alto. e defina essa posição como 0,0.
Levante cuidadosamente a cabeça do AFM de seu suporte e, em seguida, monte-a no estágio de amostra, colocando as pernas em seus respectivos slots. Para calibrar o cantilever, use a função de motor de passo para aproximá-lo da superfície da amostra. Em seguida, clique em Aproximação na janela Modo de contato para espectroscopia.
Derrube o cantilever em pequenos incrementos de 15 micrômetros. Pressione Adquirir para capturar uma curva de força. Em seguida, selecione a curva de força, abra-a na janela Gerenciador de calibração e selecione Modo baseado em contato na seção Método.
Agora use a função selecionar faixa de ajuste e selecione a curva de retração do cantilever para um ajuste de curva linear. Em seguida, marque a caixa de seleção Sensibilidade para converter a unidade de força de volt para Newton. Levante o cantilever em 100 a 200 micrômetros no líquido e selecione a função de ruído térmico Novamente, clique em Select Fit Range e ajuste a curva de sino de ruído térmico com uma curva de Lawrence.
Após o ajuste da curva, escolha a caixa K da constante da mola. Confirme se a constante da mola está próxima do valor do fabricante e anote-a para referência futura. Em seguida, coloque a amostra montada em lâmina de vasos retinianos de olho de roedor ou matriz subendotelial no estágio AFM e visualize os vasos retinianos.
Selecione Modo de contato para espectroscopia na seção Experimento do software. Em seguida, defina a força do ponto de ajuste para 0,5 nano-Newtons e clique em Aproximar. Use os parafusos de estágio no estágio AFM para posicionar cuidadosamente a sonda cantilever em um local desejado na amostra.
Clique em Aproximação para posicionar o cantilever mais próximo da amostra e, em seguida, clique em Adquirir para capturar as curvas de força. Por fim, salve todas as curvas de força para análise. As curvas de aproximação e retração obtidas de um capilar retiniano isolado de um camundongo diabético foram mais íngremes do que as obtidas de um camundongo não diabético.
