Imagem confocal 3D aprimorada de tecidos cardíacos humanos limpos com solvente

Para começar, use um bisturi para dissecar o tecido cardíaco humano fixado em paraformaldeído a 4% para caber dentro da câmara para microscopia confocal. Desidrate as amostras cardíacas em uma série graduada de metanol por uma hora cada à temperatura ambiente com agitação, seguida de imersão durante a noite em uma solução de diclorometano a 66% e metanol a 33% com agitação. No dia seguinte, branqueie a amostra executando as etapas indicadas.

Em seguida, reidratar a amostra com uma série graduada de metanol por uma hora cada com agitação. Após a imunomarcação, execute as etapas a seguir para preparar o tecido para a imagem. Fixe uma câmara contendo adesivo em uma lâmina e aplique esmalte ao redor do perímetro da câmara.

Ligue o microscópio confocal de varredura a laser vertical equipado com uma lente 5X. Usando linhas de laser apropriadas para os espectros de emissão dos fluoróforos usados, adquira imagens de varredura Tile e z-stack com uma resolução de 1024 por 1024. No nível de microescala, a limpeza do tecido de amostras cardíacas permite a visualização de gânglios contendo neurônios cardíacos e o padrão neural da inervação miocárdica.