Ensaio de migração de feridas por arranhões de células endoteliais da veia umbilical humana (HUVECs) para investigação da angiogênese in vitro

Para começar, semeie 100 microlitros de células HUVEC nos poços de uma placa de 96 poços. Coloque a placa em uma incubadora de cultura de células a 37 graus Celsius sob 5% de dióxido de carbono por seis horas para facilitar a sedimentação celular. Em seguida, substitua o meio em cada poço por 100 microlitros de meio basal de crescimento de células endoteliais, contendo 2% de FBS, e incube novamente.

No dia seguinte, posicione a placa em uma ferramenta de fabricação de 96 poços. Pressione a alavanca do dispositivo para gerar um arranhão. Levante cuidadosamente a tampa da ferramenta de criação de feridas antes de soltar a alavanca para evitar arranhões duplos.

Lave os poços duas vezes com 200 microlitros de meio basal de crescimento de células endoteliais suplementado com FBS. Depois de confirmar a remoção total de detritos, pipete 100 microlitros das soluções de estimulação ou controle preparadas em cada poço. Use um microscópio de imagem de células vivas para adquirir imagens a cada hora durante 24 horas.

O controle positivo mostrou migração bem-sucedida na área original riscada. Os problemas técnicos foram vistos como crescimento celular irregular, arranhões duplos ou ondas nas bordas dos arranhões. Um aumento de 25% na distância relativa da ferida foi considerado ideal.

A separação incorreta dos controles positivo e negativo indicou baixa faixa dinâmica.