Para começar, extraia DNA de amostras de moscas usando um kit de extração de DNA. Em seguida, use um leitor de microplacas para determinar os valores de OD260 e OD280 para comparar a pureza do DNA e a concentração de ácido nucleico. Em seguida, prepare as soluções padrão do fluorômetro adicionando 190 microlitros de solução de trabalho a dois tubos de centrífuga de 0,5 mililitros.

Em seguida, adicione 10 microlitros cada um do padrão um e do padrão dois às soluções de trabalho. Mantenha os tubos longe da luz por pelo menos 15 minutos. Misture dois microlitros de DNA de teste com 198 microlitros de solução de trabalho em um tubo de centrífuga de 0,5 mililitro e mantenha a mistura no escuro por pelo menos 15 minutos.

Após 15 minutos, ligue o fluorômetro e selecione a medição da concentração de dsDNA, configuração de longo alcance. Teste o padrão um e o padrão dois para obter a curva padrão. Em seguida, coloque as amostras a serem testadas nos poços de ensaio.

Ajuste o volume de pico de DNA para dois microlitros e realize a medição. Para visualizar o DNA, primeiro configure 20 microlitros da reação de amplificação de PCR. Coloque os tubos em um termociclador e execute os ciclos de PCR.

Após a PCR, submeta os produtos à eletroforese em gel de 2% de agarose. Em seguida, coloque o gel em um sistema de imagem de gel para análise de fotos. A avaliação da pureza do DNA extraído pelo leitor de microplacas mostrou que todas as amostras frescas e a amostra antiga tinham proporções de OD260 a OD280 acima de dois.

Em contraste, a amostra antiga dois apresentou uma proporção menor. A concentração de DNA derivada das leituras de OD260 foi maior em amostras frescas, seguida pela amostra antiga um e menor na amostra antiga dois. A análise eletroforética revelou bandas na faixa de 250 a 400 pares de bases, que foram mais pronunciadas em amostras frescas, em comparação com as antigas.