Para começar, coloque o meio celular Sf1Ep pré-aquecido recém-preparado e as células Sf1Ep descongeladas em um frasco criogênico em uma plataforma de trabalho. Adicione um mililitro de meio celular Sf1Ep ao frasco criogênico e misture delicadamente. Transfira a mistura para um tubo de centrífuga cônico estéril de 15 mililitros contendo cinco mililitros de meio celular Sf1Ep e misture delicadamente.
Centrifugar a suspensão celular a 100 G durante sete minutos e rejeitar o sobrenadante antes de ressuspender o pellet em 15 mililitros de meio celular Sf1Ep fresco. Transfira a suspensão celular para um frasco de cultura de tecidos T75 e coloque-a em uma incubadora de cultura de tecidos umidificada padrão por uma semana. Após a incubação, aspirar o meio do balão e enxaguar a camada celular com cinco mililitros de PBS estéril.
Depois de aspirar o PBS, adicione 2,5 mililitros de tripsina-EDTA ao frasco e feche a tampa. Incubar o balão a 37 graus Celsius durante cinco minutos. Bata suavemente no frasco para desalojar as células e observe ao microscópio invertido para confirmar a dispersão das células.
Adicione cinco mililitros de meio de crescimento Sf1Ep e balance o frasco para misturar com a tripsina-EDTA. Transfira a suspensão celular para um tubo cônico e quantifique as células usando um hemocitômetro ou contador de células automatizado. Para congelar as células Sf1Ep, gire as células a 100 G por sete minutos e ressuspenda o pellet em meio Sf1Ep suplementado com 10% de DMSO.
Distribua um mililitro de suspensão celular para cada frasco criogênico e congele durante a noite a menos 70 a menos 80 graus Celsius.
