Para começar, coloque uma harpa de platina em um barco de pesagem perto da plataforma MEA. Em seguida, cubra a harpa com cerca de três mililitros de aCSF para reduzir suas tendências hidrofóbicas. Use uma tesoura para aparar cerca de 1,5 polegadas da ponta estreita de uma pipeta de transferência.
Em seguida, use a pipeta modificada para coletar uma fatia de cérebro da câmara de retenção da fatia. Dispense suavemente a fatia de cérebro e qualquer solução da pipeta no poço do cavaco. Para posicionar a fatia corretamente, use um pincel macio para criar uma corrente na solução que empurra a fatia do cérebro para os eletrodos de gravação.
Usando uma pinça, coloque suavemente a harpa sobre a fatia do cérebro com os fios para baixo para pressionar a fatia nos eletrodos de gravação. Oriente a harpa de forma que o lado sem moldura fique voltado para a agulha de entrada e a armação da harpa não entre em contato com nenhum dos eletrodos de gravação. Agora pegue uma pipeta de descarte e remova o excesso de aCSF.
Em seguida, pegue um lenço antiestático, gire um canto para criar uma ponta e use-o para absorver o aCSF restante ao redor dos eletrodos de gravação sem tocar nos eletrodos de gravação, fatia de cérebro ou harpa. Usando uma pipeta de aCSF designada, adicione rapidamente cerca de dois mililitros de aCSF carbogenado para cobrir a fatia do cérebro. Encha o poço com cerca de três mililitros de aCSF carbogenado até que esteja cerca de três quartos cheio.
Em seguida, use um microscópio ou câmera para tirar uma foto de alta resolução da fatia do cérebro no chip MEA. Colocar os tubos de entrada e saída no copo cheio de aCSF. Coloque a agulha de entrada perto da parte inferior do poço do chip, do lado de fora dos eletrodos de gravação.
Em seguida, coloque a agulha de saída perto do topo do poço do cavaco, em direção à borda, de modo que o líquido suba quase até a borda do poço do cavaco, cerca de quatro mililitros. Agora defina o fluxo de entrada de perfusão para cinco mililitros por minuto e o fluxo de saída de perfusão para sete mililitros por minuto. Ligue a entrada e a saída.
Remova a agulha de entrada do poço do cavaco até que ela comece a produzir solução em vez de ar. Depois disso, coloque a agulha de volta dentro do poço do chip. Em seguida, use um aquecedor de solução para manter a solução na temperatura fisiológica ou próxima dela, em torno de 34 a 37 graus Celsius.
Deixe o aCSF perfundir sobre a fatia do cérebro por 10 minutos. Decorridos 10 minutos, desloque o tubo de saída para o copo de eliminação. Em seguida, mova o tubo de entrada para o béquer contendo a solução pró-convulsivante.
Deixar que o líquido de aCSF não convulsivante seja eliminado do sistema de perfusão para o copo de descarte durante 10 minutos. Por fim, transferir o tubo de saída para o copo que contém a solução pró-convulsivante e deixá-lo circular até ao fim da experiência. Poderosa atividade eletrográfica semelhante a convulsões foi freqüentemente observada nas regiões neocorticais sob os paradigmas zero magnésio e 4-aminopiridina.
As regiões do hipocampo exibiram mais variabilidade entre as fatias do cérebro, com algumas demonstrando atividade semelhante a convulsões e outras mostrando descargas transitórias. A atividade neocortical sob o paradigma de magnésio zero apresentou maior potência em múltiplas bandas de frequência em comparação com o paradigma de 4-aminopiridina. A atividade hipocampal no paradigma de magnésio zero demonstrou maior potência em bandas de alta frequência gama em comparação com o neocórtex e ambas as regiões cerebrais no paradigma 4-aminopiridina.
