Para começar, organize o equipamento cirúrgico estéril em uma plataforma cirúrgica. Aproximadamente 72 horas após o implante do eletrodo eletromiográfico do músculo diafragma, ou EMG, pesar o rato. Antes de anestesiar o rato, coloque-o em uma gaiola estilo Bowman.
Conecte cuidadosamente os fios, saindo do dorso do rato a um pré-amplificador para registrar a EMG bilateral do músculo diafragma. Em seguida, coloque o rato anestesiado em decúbito ventral. Raspe o cabelo do pescoço na altura da orelha e até as escápulas.
Conecte os fios do eletrodo expostos das costas do rato ao amplificador. Desinfete a pele alternando com gluconato de clorexidina a 4% e álcool isopropílico três vezes. Cubra o rato com capas cirúrgicas estéreis, exceto no dorso superior.
Usando um bisturi, faça uma incisão rostrocaudal de quatro centímetros. Retraia a pele e corte o músculo acromiotrapézio. Em seguida, disseque o músculo romboide para expor os músculos espinhais.
Sob um microscópio cirúrgico, remova o espinhal de C1 para C3. Em seguida, use rongeur para realizar cuidadosamente uma laminectomia em C2 sem danificar as principais artérias ou nervos. Corte e remova a dura-máter em C2. Enquanto monitora a EMG do músculo diafragma, insira a faca de dissecação angular logo abaixo do ponto onde a raiz dorsal entra na medula espinhal e corte todo o caminho até o ponto médio da superfície ventral. Em seguida, registre a atividade EMG do diafragma ipsilateral eupneico no rato anestesiado com hemissecção espinhal C2 realizada.
Suturar os músculos da medula espinhal com suturas 3-0 e, em seguida, fechar a incisão na pele. Para manter a hidratação, injete por via subcutânea um mililitro de solução salina por 50 gramas de massa animal. Coloque o rato em uma gaiola limpa com uma almofada de aquecimento para recuperação.
Defina o filtro passa-banda alta do préamplifier para 100 hertz e o filtro passa-baixa para 1000 hertz. Depois de coletar um a dois minutos de registro EMG EMG do hemidiafragma esquerdo e direito, salve a data em um formato apropriado para análises posteriores. Um exemplo bem-sucedido de hemissecção espinhal de C2 mostrou a ausência de atividade EMG do diafragma ipsilateral eupneico sob anestesia no terceiro dia pós-lesão.
A atividade EMG do músculo diafragma em condições de vigília mostrou uma redução no diafragma ipsilateral eupneico em comparação com a linha de base pré-lesão. A atividade EMG do músculo diafragma contralateral aumentou tanto na anestesia quanto na vigília.
