Cultura in vitro de Plasmodium falciparum e sincronização de sorbitol para transfecção para desvendar mecanismos compensatórios usando CDPK1

Para começar, cultive a cepa NF54 de Plasmodium falciparum em 2% de hematócrito de hemácias O+ humanas em meio RPMI completo suplementado. Para sincronização de sorbitol, pulverize os parasitas assíncronos em um tubo cônico de 50 mililitros a 2.300 G por três minutos em temperatura ambiente. Depois de descartar o sobrenadante, incubar os glóbulos vermelhos parasitados com nove volumes de 5% de sorbitol por 10 minutos a 37 graus Celsius.

Após a incubação, pulverize os glóbulos vermelhos conforme demonstrado anteriormente e descarte o sorbitol. Lave os parasitas tratados com sorbitol com meio RPMI e RPMI incompleto sem AlbuMAX e bicarbonato de sódio. Posteriormente, incube-os em RPMI completo para obter os parasitas do estágio de anel.