Verificação por PCR de Parasita Transgênico com Modificação Desejada do Locus cdpk1 para Elucidar Mecanismos de Resistência à Quinase de Plasmodium falciparum

Para começar, trate os parasitas transformados do Plasmodium falciparum com os medicamentos desejados. Após dois a três dias de crescimento do parasita, centrifugue 500 microlitros de cultura em um tubo de microcentrífuga a 2.400 G por cinco minutos. Para lisar as hemácias, incubar um mililitro dos parasitas ressuspensos com 10 microlitros de saponina a 10% a quatro graus Celsius por cinco minutos.

Depois de centrifugar as células, descartar o sobrenadante para obter o sedimento do parasita. Lave o pellet do parasita com um mililitro de PBS e ressuspenda o pellet em 50 microlitros de água livre de DNAse e RNAse. Aqueça o pellet ressuspenso a 95 graus Celsius por cinco minutos e centrifugue a 16.200 G por 10 minutos a quatro graus Celsius.

Transfira o sobrenadante contendo DNA do parasita para um novo tubo.