Para começar, verifique a sequência dos genes desejados isolados dos parasitas Plasmodium falciparum tratados com drogas. Após diluir as hemácias parasitadas, adicione um volume apropriado para atingir um total de 50 parasitas em 10 mililitros de meio, garantindo 2% de hematócrito. Em seguida, adicione 100 microlitros deste meio contendo 50 parasitas a cada poço da placa de 96 poços.
Coloque a placa em um secador hermético com lavagem de gás misturado. E incubar a 37 graus Celsius, reabastecendo a mídia a cada dois dias. Substitua o meio por RPMI completo contendo 2% de hematócrito a cada sete dias até que os parasitas apareçam.
Incline a placa de 96 poços em um ângulo de 45 graus para permitir que os glóbulos vermelhos se acalmem. Remova cuidadosamente o meio de cada poço usando uma pipeta multicanal. Observe uma mudança de cor para amarelo ou vermelho escuro em poços contendo parasitas, o que contrasta com a cor rosa do meio em poços livres de parasitas.
Em seguida, retire uma pequena quantidade de cultura do poço que exibe a mudança de cor e prepare um esfregaço em uma lâmina rotulada. Depois de realizar a coloração de Giemsa, observe a lâmina ao microscópio. Transfira o conteúdo do poço onde os parasitas foram observados para um frasco T25 e incube para permitir que os parasitas cresçam por quatro a cinco dias.
Quando a parasitemia atingir dois a 3% de saponina, lise 500 microlitros de cultura do parasita. E extraia o material genético do parasita.
