Estimulação e incubação de amostras de sangue total para análise específica do antígeno da imunidade do hospedeiro a patógenos fúngicos e virais

Para começar, prepare tubos de coleta de sangue de 2,7 mililitros sem anticoagulante, com antígenos e anticorpos co-estimulatórios em condições estéreis. Adicione anti-CD28 e anti-CD49d em cada tubo, incluindo o controle negativo. Se congelados, descongele os tubos de estimulação prontos para uso em temperatura ambiente cerca de 30 a 60 minutos antes da estimulação do sangue total.

Colete sangue venoso do doador ou paciente usando tubos de coleta de sangue com anticoagulante de heparina de lítio. Pipete a quantidade necessária de sangue total heparinizado para os tubos de estimulação sob uma bancada estéril. Inverta cuidadosamente os tubos cerca de 5 a 10 vezes.

Em seguida, coloque os tubos em uma incubadora a 37 graus Celsius. Após quatro horas de incubação, preparar um miligrama por mililitro de solução de brefeldina A em meio RPMI. Em uma bancada de trabalho estéril, destampe os tubos usados para análise de citometria de fluxo.

Em seguida, transfira 1% do volume da amostra da solução de brefeldina A para o tubo de estimulação. Incube os tubos tampados a 37 graus Celsius por mais 16 a 18 horas.