É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo.

live

Speed

×

MEDIA_ELEMENT_ERROR: Format error

Cultivo in vitro e manutenção de nematoides de madeira de pinheiro usando Botrytis cinerea

Transcrição

Para começar, transfira um tampão de cultura de botrytis cinerea da borda mais externa da colônia para uma placa de trado de dextrose de batata estéril. Incube a placa a 25 graus Celsius por sete a 10 dias ou até que a colônia de fungos atinja a borda da placa. Cultura B cinerea em grãos de cevada orgânicos certificados, hidratados e esterilizados a vapor por sete a 10 dias.

Ou até que a superfície do cereal esteja totalmente colonizada. Em seguida, inocular a cultura de B cinerea com uma suspensão de nemátodo Pinewood. Incube o frasco no escuro por sete a 10 dias ou até que a colônia de fungos seja completamente consumida e o nematóide suba pelas paredes do frasco.

Para isolar os nematóides de Pinewood, enxágue as paredes do frasco com água da torneira. Em seguida, despeje o conteúdo em uma toalha de papel, colocada em um funil ou bandeja Baermann, e mergulhe os nematóides em água. Após 24 a 48 horas, recuperar os nemátodes utilizando uma peneira de malha de 38 micrómetros.

Lave os nematóides acumulados em um recipiente com água da torneira. Usando esta metodologia, a população de nematóides de Pinewood aumentou 100 vezes em um período de crescimento de oito dias.

Usamos cookies para melhorar sua experiência em nosso site.

Ao continuar usando nosso site ou clicando em 'continuar', você concorda em aceitar nossos cookies.

Saiba mais