Processo de Infecção In Vivo de Mudas de Pinus pinaster com Nematóides da Floresta de Pinheiro

Para começar, defina suspensões de nematóides mistos de madeira de pinheiro em estágio de vida para 1000 nematóides por mililitro. Conte os nematóides em uma lâmina côncava sob o microscópio binocular com ampliação de até 40x. Antes de inocular os nematóides, remova manualmente as agulhas de uma seção abaixo dos cinco centímetros superiores do caule do pinheiro e faça uma incisão longitudinal superficial usando um bisturi esterilizado.

Na zona de ferimento, coloque um pedaço de algodão esterilizado para conter 0,5 mililitros de suspensão de nematóide de madeira de pinho e fixe-o com uma tira transparente para manter a umidade. Mantenha a estufa em condições úmidas e regue com frequência. Acompanhe a progressão da doença da murcha do pinheiro regularmente e pontue a sintomatologia quantificando a porcentagem de agulhas descoloridas e murchas.

Aos 20 dias após a inoculação, cortar as mudas na base do caule para extração de voláteis. Coloque as mudas em sacos de papel pardo e congele a 20 graus Celsius negativos. A infecção bem-sucedida de mudas de pinheiro com o nematóide da madeira de pinheiro resultou em sintomas da doença da murcha do pinheiro cerca de 20 dias após a infecção.