Para começar, pique os cérebros isolados em pedaços de aproximadamente um milímetro quadrado com uma lâmina de bisturi descartável estéril. Transfira cuidadosamente os cérebros picados para um novo tubo estéril de 50 mililitros. Adicione uma concentração final de 0,25% de tripsina aos cérebros picados.
Incube o tecido em banho-maria a 37 graus Celsius por 20 minutos. Adicione cinco mililitros de meio de cultura glia completo para neutralizar a tripsina e misture suavemente a suspensão de tecido usando uma pipeta de 10 mililitros. Transvase cuidadosamente a suspensão celular através do filtro celular.
Em seguida, remova o êmbolo de uma seringa estéril de um mililitro e triture o tecido na malha usando o êmbolo. Adicionar volumes iguais de suspensão celular contendo um a dois cérebros com meios de cultura de glia a cada frasco, resultando num volume final de 15 mililitros. Células esparsas e detritos celulares excessivos foram observados no primeiro dia.
No quarto dia, os astrócitos aderentes foram gerados. Células confluentes com morfologia típica de astrócitos foram observadas no oitavo dia de cultivo.
