Incorporação de amostras de retina para estudar sinapses de fotorreceptores usando microscopia eletrônica de volume

Para começar, obtenha as tiras de retina de camundongos e lave-as cinco vezes em tampão de cacodilato de sódio 0,1 molar por 15 minutos. Em seguida, incube as tiras com solução de ferrocianeto de potássio e tetróxido de ósmio no escuro sobre gelo por 1,5 horas. Lave as tiras três vezes em água bidestilada e incube-as com tio-carbo-hidrazida a 1%.

Após enxaguar com água bidestilada Desidrate as tiras da retina com concentrações crescentes de etanol. Em seguida, trate as tiras de retina com uma solução contendo etanol e acetona iguais por 20 minutos, seguidas de duas lavagens de acetona por 20 minutos cada.

Incube sequencialmente as tiras de retina em misturas de resina de acetona no escuro à temperatura ambiente. Infiltre as tiras de retina com resina pura por 24 horas a 45 graus Celsius, seguida de resina fresca por 48 horas a 60 graus Celsius. A microscopia eletrônica de varredura por feixe de íons focalizado dos terminais fotorreceptores da retina usando este método preserva a estrutura da membrana celular e os contornos das vesículas com mais clareza do que o método tradicional de dupla fixação.