Preparação de reagentes e material de álamo para inoculação de folhas in vivo

Comece adicionando extração de batata, dextrose e broca em água para preparar trado de dextrose de batata ou meio de cultura PDA para cepas de fungos. Aqueça a solução a 100 graus Celsius por 10 minutos para dissolver completamente os componentes. Pobre PDA médio em tubos de 25 mililitros.

Esterilize todos os tubos a 121,1 graus Celsius por 30 minutos. Em seguida, resfrie os tubos esterilizados em uma bancada limpa a 50 a 60 graus Celsius. Despeje o meio em placas de cultura de 9,0 centímetros de diâmetro e resfrie-as em temperatura ambiente.

Em seguida, corte o micélio do patógeno fúngico cultivado em meio BDA a 28 graus Celsius por sete dias em cubos quadrados de aproximadamente 0,5 centímetro. Inocule os cubos de fungos no centro das placas de PDA, garantindo que os lados do micélio estejam voltados para o meio. Em seguida, cultive os patógenos fúngicos inoculados em uma incubadora termostática por sete a 10 dias.

Após a incubação, corte o meio PDA contendo o micélio fúngico em cubos quadrados com lados de 1,0 a 1,2 centímetros de comprimento. Selecione as folhas totalmente estendidas recém-amadurecidas do topo dos galhos principais de clones de choupo de 1 ano, certifique-se de que as folhas estejam livres de pragas, doenças e danos mecânicos. Para ramos de um ano de idade de clones híbridos de choupo perene, selecione a quinta a sétima folhas superiores dos ramos selecionados como materiais inoculados.

Pulverize os clones ou galhos de choupo selecionados com água limpa. Após a secagem, limpe as folhas selecionadas com álcool 75%, uma hora ou um dia antes das manipulações da inoculação.