Coloração com azul de anilina para visualizar plasmodesmos em folhas de plantas agroinfiltradas usando microscopia confocal

Para começar, obtenha-se folhas de Nicotiana benthamiana infiltradas com as células de agrobacterium tumefacien que abrigam os vetores desejados. Para visualização de plasmodesmos, adicione uma alíquota de 200 microlitros de azul de anilina a 1% em uma lâmina de microscópio. Em seguida, com uma lâmina, extirpar a área foliar infiltrada da nervura e transferi-la para a solução de azul de anilina na lâmina com o lado abaxial para cima.

Certifique-se de que a amostra de tecido foliar esteja totalmente submersa antes de cobri-la com uma lamínula. Coloque a lâmina com a amostra em um dessecador conectado a uma bomba de vácuo. Evacuar durante dois minutos a menos de 0,8 pascal.

Em seguida, libere lentamente a pressão e incube a lâmina no escuro por 30 minutos em temperatura ambiente. Agora, visualize o sinal fluorescente do azul de anilina sob um microscópio confocal de varredura a laser.