O projeto descrito foi apoiada por números Award HL064761 R01, R25 HL059868, 1SC1 HL099139 e P20 MD000175 forma National Institutes of Health. O conteúdo é da exclusiva responsabilidade dos autores e não representam, necessariamente, a posição oficial do National Institutes of Health.

1. Isolamento da artéria mesentérica de ratos pequenos <ol><li> Anestesiar animais com isoflurano em uma câmara fechada e limpe o abdômen com álcool. </li><li> Realizar uma laparotomia na linha média para expor cama mesentérica. </li><li> Com uma tesoura, retire cerca de 85 cm de intestino com a alimentação vasculatura com a artéria mesentérica superior. Corte a extremidade proximal da seção intestinal perto do piloro e da extremidade distal perto da junção íleo-coecal. Segmentos do intestino são isolados de ratos que estão profundamente anestesiados com isoflurano e submetidos à eutanásia por open-peito punção cardíaca. </li><li> Colocado seção extirpado numa placa de Petri revestidas contendo PSS e realizar a dissecção da artéria mesentérica em temperatura ambiente. </li><li> Pino para baixo a extremidade proximal do intestino no lado direito e pinos para fora o restante da direção intestineina sentido anti-horário (final ieproximal sobre a vasculatura alimentação deixou do outro lado do intestino). </li><li> Dissecar o ramo II e III segmentos juntos com um pedaço do segmento proximal. </li><li> Dissecar a veia e isolar a artéria (com V-shaped ponto de ramificação) e limpá-la através da remoção do tecido adiposo e conjuntivo. Evitar o contato direto com a artéria puxando delicadamente com uma pinça e corte através da membrana do tecido conjuntivo. </li></ol> 2. Montagem do navio <ol><li> Corte dois pequenos segmentos (≈ 4 cm) de um 40 mM de tungstênio sem fio de aço inoxidável e, com uma pinça fina, insira um para o lúmen de cada artéria tomando cuidado para não danificar o endotélio. Use a ponta do fio para abrir a luz, se necessário. Sangue escorrendo para fora da embarcação é um bom sinal o lúmen é aberto. </li><li> Encha a câmara myograph com solução salina fisiológica (PSS; mM: 115 NaCl, 4,7 KCl, 1,4 MgSO 4 .7 H 2 O, 5 NaHCO 3, 1,2 K 2 HPO 4, 1,1 Na 2 HPO 4, 1,0 CaCl 2, 20 e HEPES 5 de glicose, pH 7,4) com ácido ascórbico (100 mM) a 37 ° C e usando fórceps transferir cuidadosamente o segmento de rosca navio da placa de Petri na câmara à temperatura ambiente e transferir o segmento navio excisadas proximal para a câmara de myograph e puxe a final ao longo do fio para alimentá-lo dentro do vaso. Evitar esticar o navio. </li><li> Garantir o fim próximo do fio de sentido anti-horário sob o parafuso de fixação perto na mandíbula do lado direito ligado ao micrômetro. Pegar a extremidade livre do fio com uma pinça e prenda-o no sentido horário sob o parafuso de fixação muito na mandíbula do lado direito. Certifique-se que o segmento de navios ao longo do fio está situado no intervalo entre as mandíbulas sem fazer qualquer contato com a própria mandíbula. </li><li> Parafuso as mandíbulas separadas, e alinhar o segundo fio paralelo com o navio e inseri-lo na extremidade da luz. Suavemente alimentar o fio através do lúmen do segmento de navio em um movimento usando o fio já está montado como um guia. Segure o fio cerca de 1 cm do navio para evitar esticar-la durante a manobra e evite tocar o endotélio. </li><li> Parafuso as mandíbulas juntas e garantir que o segundo move fio debaixo de montagem o primeiro garantido na mandíbula do lado direito. </li><li> Garantir o fim próximo do segundo fio no sentido horário sob o parafuso de fixação perto da mandíbula do lado esquerdo ligado ao transdutor. </li><li> Assegurar a extremidade do fio sob o parafuso de fixação na mandíbula do lado esquerdo e aperte para esticar o fio. </li><li> Uma vez que a montagem está completa, reinicie o motor no &quot;Menu de montagem&quot; e começar a normalização do navio. </li></ol> 3. Normalização O Auto Myograph fio duplo System-510A tem uma função de normalização automatizado, que é avaliada a partir da &quot;normalização&quot; no menu e permite que o navio a ser esticado a uma circunferência normalizado interna por um procedimento padronizado de acordo com o protocolo do fabricante, após equilíbrio por 30 min a 37 ° C. Uma curva exponencial é então ajustada aos dados de pressão interna circunferência. O procedimento define o diâmetro do lúmen (d 100) que a artéria teria in vivo quando relaxado e sob uma pressão transmural de 100 mmHg 1 Os parâmetros de normalização para artéria mesentérica de ratos são as seguintes.: <ol><li> Pressão transmural alvo = 13,3 kPa (100 mm Hg). </li><li> Tempo = 60 seg; Duração de cada uma das etapas de normalização. </li><li> IC 1 / IC 100 = 0,9 (IC 1 = circunferência normalizado interna, IC 100 = circunferência interna correspondente à pressão alvo. </li><li> Calibração ocular 2 * Δ (mm / ocular divisão); 2 delta é por razões de programação. </li></ol> Meça o comprimento da artéria mesentérica montado usando o microscópio de olho peça leituras quando os fios são mais as extremidades longe e de perto do navio montado segment. Resumidamente, o comprimento do segmento de navio montada é medida a ampliação máxima com uma ocular calibrada olho peças no microscópio de dissecação. A leitura do olho peças com cabelo-line sobre a extremidade do segmento (a 1) e perto do final do segmento (a 2) nas divisões ocular são medidos e registados. Estes valores, com as leituras micrômetro, antes e após o alongamento da embarcação são registrados e entrou em menus para o programa para calcular a curva ajustada eo diâmetro interno correspondente à uma meta de pressão transmural de 100 mm Hg Em nossos estudos, as artérias foram criados para o diâmetro do lúmen do d 1 = 0,9 xd 100, onde o desenvolvimento força ativa é máxima. Desenvolvimento da força ativa de ≥ 10 mN em artérias mesentéricas de ratos é considerada ideal para experimentos para prosseguir. Tecidos com menor força ativa foram descartados. 4. Medição de respostas Após a normalização, as propriedades mecânicas e funcionais dos vasos são re-ativado por realizar uma &quot;start-padrão&quot;, que envolve vasos desafiador, com aplicações repetidas (normalmente 2 ou 3) de 5 mM de fenilefrina (PE) para obter contrações reprodutível. A &quot;start padrão&quot; típico em nosso laboratório consiste de uma série de estímulos e os períodos de washout da seguinte forma: <ol><li> Substituir câmara myograph cobrir e começar a aeração com ar de 95% e 5% CO 2. </li><li> Encher a câmara com PSS fresco (ácido ascórbico, contendo 100 mM) </li><li> Navio contrato com 5 mM PE por 5 min e lavar 4 vezes com tampão de PSS. </li><li> Após a última lavagem, recarga com câmara de PSS e esperar 3 min antes de repetir os passos (ii) e (iii). </li></ol> Após o início padrão, a artéria está pronto para o experimento. Relaxamento dos vasos contratados são avaliados pela adição cumulativa de concentrações crescentes de CaCl 2 (0,5-4 mM). Embarcações, quando os inibidores são usados ​​são pré-incubadas com os compostos na câmara myograph por 20 min e presente durante os ensaios. 5. Análise de Dados A &quot;normalização&quot; dos dados para os navios e os traçados força, diretamente convertido em dados de texto, foram analisadas com o programa de 11,0 SigmaPlot gráficos (Systat Software, Point Richmond, CA) e plotados como mostrado na Figura 1. Concentração-resposta de dados, calculados a partir dos traçados, foram analisados ​​através da determinação EC 50 valores a partir de dados experimentais instalados em uma função logística quatro parâmetros no menu de Farmacologia do programa. Comparações entre grupos e dentro dos grupos foram realizadas por uma análise de variância (ANOVA) e as diferenças com 0,05 p &lt;são considerados significativos. 6. Resultados representativos: <table border="1"><tbody><tr><th> Parâmetros </th><th> Wistar </th><th> Dahl sensíveis ao sal </th><th> Dahl sal-resistente </th></tr><tr><td> L 100 (mm) </td><td> 83,26 ± 2,33 </td><td> 91,52 ± 4,67 </td><td> 117,45 ± 8,43 * </td></tr><tr><td> X 1 </td><td> 604,21 ± 41,97 </td><td> 752,24 ± 85,25 </td><td> 745,84 ± 110,09 </td></tr><tr><td> r 2 </td><td> 0,99 ± 0,003 </td><td> 0,97 ± 0,008 </td><td> 0,97 ± 0,007 </td></tr></tbody></table> * A diferença entre os valores para L 100 Wistar e DR são estatisticamente significativas. Shapiro-Wilk teste de normalidade passado (p = 0,588), Teste de Igualdade de Variância passado (p = 0,237). L 100 = diâmetro interno do segmento montado correspondente à pressão transmural alvo. X 1 = A configuração do posicionador micro necessário para esticar o navio montado em sua circunferência interna normalizado (ou seja, o valor da leitura micrômetro em que os experimentos foram realizados). r 2 = coeficiente de regressão para ajuste de (X i, Y i) para uma curva exponencial. NB: O procedimento detalhado está descrito no manual para o Sistema Myograph 510A 6. Tabela 1. Sample Leia-Out dos parâmetros de normalização para os segmentos de artéria mesentérica Wistar, DS e DR de programa básico mostrado no &quot;Menu normalização&quot;. Os valores são médias (± SEM) de 5 animais. * As diferenças entre os valores para L 100 Wistar e DS são estatisticamente significativas (p &lt;0,05). <table border="1"><tbody><tr><th> Wistar </th><th> DS </th><th> DR </th></tr><tr><td> 14,2 ± 0,6 </td><td><strong&gt; 25,8 ± 2,7 * </td><td> 20,9 ± 1,3 * </td></tr></tbody></table> Tabela 2. Tensões Desenvolvidos (mN) em artérias mesentéricas isoladas de Wistar, DS e ratos DR, na sequência de pedidos de 5 mM PE para cada navio. Valores reportados são meios (± SEM) de 6-8 animais. * Significativamente diferente do Wistar controles (p &lt;0,05). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig1.jpg" /> Figura 1. Ca 2 + e relaxamento induzido de uma artéria mesentérica PE-contratados a partir de um rato Wistar montado em um myograph fio em solução salina fisiológica contendo 1 mM Ca 2 +. A artéria foi equilibrada por 30 min a 37 ° C com aeração constante e respostas para Ca 2 + e determinado. Uma força representativa de rastreamento em adição de 5 mM PE seguido por adições acumulada de Ca 2 + é mostrada. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig2.jpg" /> Figura 2. Ca 2 + e relaxamento induzido de uma artéria mesentérica PE-contratados a partir de um rato DS montado em um myograph fio em solução salina fisiológica contendo 1 mM Ca 2 +. A artéria foi equilibrada por 30 min a 37 ° C com aeração constante e respostas para Ca 2 + e determinado. Uma força representativa de rastreamento em adição de 5 mM PE seguido por adições acumulada de Ca 2 + é mostrada. Ca 2 + relaxamento foi severamente comprometida neste tecido em comparação com aqueles de ratos Wistar e DR. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig3.jpg" /> Figura 3. Ca 2 + e relaxamento induzido de uma artéria mesentérica PE-contratados a partir de um rato DR montado em um myograph fio em solução salina fisiológica contendo 1 mM Ca 2 +. A artéria foi equilibrada por 30 min a 37 ° C com aeração constante e respostas para Ca 2 + e determined.A força representativa de rastreamento em adição de 5 mM PE seguido por adições acumulada de Ca 2 + é mostrada. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig4.jpg" /> Figura 4. A. [Ca 2 +] e-resposta curvas. B. O gráfico de barras mostrando EC 50 valores para o relaxamento determinado pelo ajuste dos dados para um quatro expressão curve.C.CaR parâmetro logística em arcadas mesentéricas isoladas de ratos DR e DS.

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	<li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260, 617-619 (1976).</li><li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro.">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents Actions. 2, 257-260 (1972).</li><li>Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Procedures+for+investigating+of+small+vessels+using+small+vessel+myograph.">Procedures for investigating of small vessels using small vessel myograph.</a> DMT Danish Myo Technology. , (2004).</li><li>Angus, J. A., Wright, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+to+study+the+pharmacodynamics+of+isolated+large+and+small+blood+vessels.">Techniques to study the pharmacodynamics of isolated large and small blood vessels.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 44, 395-407 (2000).</li><li>Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. 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D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+chronic+sensory+denervation+on+Ca2+-induced+relaxation+of+isolated+mesenteric+resistance+arteries.">Effect of chronic sensory denervation on Ca2+-induced relaxation of isolated mesenteric resistance arteries.</a> Am. J. Physiol. 274, 1655-1661 (1998).</li><li>Mupanomunda, M. M., Ishioka, N., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interstitial+Ca2++undergoes+dynamic+changes+sufficient+to+stimulate+nerve-dependent+Ca2+-induced+relaxation.">Interstitial Ca2+ undergoes dynamic changes sufficient to stimulate nerve-dependent Ca2+-induced relaxation.</a> Am. J. Physiol. 276, 1035-1042 (1999).</li><li>Mupanomunda, M. M., Tian, B., Ishioka, N., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+interstitial+Ca2+.">Renal interstitial Ca2+.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 278, F644-F649 (2000).</li><li>Awumey, E. M., Hill, S. K., Diz, D. I., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytochrome+P-450+metabolites+of+2-arachidonoylglycerol+play+a+role+in+Ca2+-induced+relaxation+of+rat+mesenteric+arteries.">Cytochrome P-450 metabolites of 2-arachidonoylglycerol play a role in Ca2+-induced relaxation of rat mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2363-2370 (2008).</li><li>Chen, W., Bergsman, J. B., Wang, X., Gilkey, G., Pierpoint, C. R., Daniel, E. A., Awumey, E. M., Dauban, P., Dodd, R. H., Ruat, M., Smith, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+external+calcium+signaling+involves+the+calcium-sensing+receptor+in+neocortical+nerve+terminals.">Presynaptic external calcium signaling involves the calcium-sensing receptor in neocortical nerve terminals.</a> PloS One. 5, e8563-e8563 (2010).</li><li>Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+perivascular+sensory+nerve+Ca2++receptor+and+blood+pressure+regulation:+a+hypothesis.">The perivascular sensory nerve Ca2+ receptor and blood pressure regulation: a hypothesis.</a> Am. J. Hypertens. 11, 1117-1123 (1998).</li><li>Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+Ca2++and+blood+pressure:+evidence+that+Ca2+-sensing+receptor+activated+sensory+nerve+dilator+activity+couples+changes+in+interstitial+Ca2++with+vascular.">Dietary Ca2+ and blood pressure: evidence that Ca2+-sensing receptor activated sensory nerve dilator activity couples changes in interstitial Ca2+ with vascular.</a> 16, 218-221 (2001).</li></ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

A hipertensão é uma das principais causas de morbidade cardiovascular, renal e cerebral / mortalidade. A ocorrência de hipertensão é alta na população e hipertensão sal-sensível é particularmente elevada na população idosa, e mais prevalente em negros do que brancos. Este é acreditado para ser devido à tendência dos negros para reter sódio em seus rins 9. Sal-sensibilidade é um fator importante que contribui para a doença renal e está associada à disfunção endotelial, mas o mecanismo nã...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome de equipamentos / reagentes </th><th> Companhia </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentários (opcional) </th></tr><tr><td> Auto Myograph fio duplo System-510A DMT-EUA, Inc. </td><td> Atlanta, GA. </td><td> 100151 </td><td></td></tr><tr><td> PowerLab/4SP Sistema de Aquisição de Dados </td><td> ADInstruments, Colorado Springs, CO </td><td> ML750 </td><td> Novos modelos com 4-16 canais de entrada estão disponíveis. </td></tr><tr><td> Dell Dimension XPS Gen 4 Computador </td><td> Dell </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Stemi SV II (Apo) microscópio de dissecção com Ocular </td><td> Carl Zeiss International. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Wistar, Dahl sensíveis ao sal, Dahl sal-resistentes ratos </td><td> Harlan Sprague Dawley, Indianapolis, IN. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Para roedores </td><td> Harland Tekland, Madison, WI. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Fenilefrina </td><td> Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Outros produtos químicos </td><td></td><td></td><td> Todos os produtos químicos utilizados foram da mais pura notas disponíveis comercialmente. </td></tr></tbody></table>

mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography

Vasos de resistência proximal, tais como as artérias mesentéricas, contribuem substancialmente para a resistência periférica. Esses pequenos vasos entre 100-400 mM em função de diâmetro principalmente no direcionamento do fluxo de sangue para vários órgãos de acordo com os requisitos gerais do corpo. A artéria mesentérica de ratos tem um diâmetro superior a 100 mm. A técnica Miografia, primeiramente descrita por Mulvay e Halpern 1, foi baseada no método proposto por Bevan e Osher 2. A técnica fornece informações sobre navios de pequeno porte em condições isométricas, onde o encurtamento substancial da preparação muscular é impedida. Desde produção de força e sensibilidade de navios para diferentes agonistas é dependente da extensão do trecho, de acordo com a relação tensão-comprimento ativo, é essencial a realização de estudos de contração isométrica em condições para impedir o cumprimento dos fios de montagem. Fios de aço inoxidável são preferíveis aos fios de tungstênio por causa da oxidação deste último, que afeta as respostas registradas 3. A técnica permite a comparação de agonista-induzida contrações dos vasos montados para obter provas para a função normal de receptores vascular das células musculares lisas. Temos demonstrado em vários estudos que artérias mesentéricas isoladas que são contratados com phenylyephrine relaxar com a adição de concentrações cumulativas de cálcio extracelular (Ca 2 + e). As descobertas levaram-nos a concluir que os nervos sensoriais perivascular, que expressam a proteína G acoplada Ca 2 + receptor-sensing (CaR), mediar esta resposta vasorelaxamento. Utilizando um método automatizado Miografia fio, mostramos aqui que artérias mesentéricas de Wistar, Dahl sensíveis ao sal (DS) e Dahl sal-resistentes (DR) ratos respondem diferentemente ao Ca 2 + e. Tecidos de ratos Wistar mostrou Ca 2 + maior sensibilidade em comparação com os de DR e DS. CaR expressão reduzida em artérias mesentéricas de ratos DS correlaciona-se com Ca 2 + reduzida de relaxamento e-induzida de isoladas, pré-contraídos artérias. Os dados sugerem que o carro é necessário para o relaxamento das artérias mesentérica sob tônus ​​adrenérgico aumentado, como ocorre na hipertensão, e indicar um defeito inerente na via de sinalização CaR em animais Dahl, que é muito mais grave no DS. O método é útil para determinar a reatividade vascular ex vivo nas artérias mesentéricas de resistência e similares pequenos vasos sanguíneos e comparações entre diferentes agonistas e / ou antagonistas podem ser facilmente e constantemente avaliada lado a lado 6,7,8.

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Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Um método automatizado para medições Miografia vigor em artérias mesentéricas isoladas é descrito. Ele emprega um Mulvany-Halpern Auto Myograph fio duplo 510A para determinar as respostas à fenilefrina e cálcio extracelular. O método permite a determinação consistente de respostas isométrica aos agonistas em pequenos vasos de diâmetros de 60 - 300 mm, de forma independente.

A contração da artéria mesentérica e Estudos Relaxamento Usando Miografia Fio Automated

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

mesenteric-artery-contraction-relaxation-studies-using-automated-wire

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28.4K visualizações.  North Carolina Central University, Durham. Um método automatizado para medições Miografia vigor em artérias mesentéricas isoladas é descrito. Ele emprega um Mulvany-Halpern Auto Myograph fio duplo 510A para determinar as respostas à fenilefrina e cálcio extracelular. O método permite a determinação consistente de respostas isométrica aos agonistas em pequenos vasos de diâmetros de 60 - 300 mm, de forma independente.