Neste vídeo, introduzimos como usar um cilindro e teste de campo aberto para estreitar a função motora no modelo MPTP da doença de Parkinson. A principal vantagem é que os ratos não precisam ser treinados antes do teste comportamental. Além disso, esse método é eficiente e o custo do equipamento é baixo.
Indivíduos novos em testes comportamentais podem subestimar o efeito da interferência ambiental. Manter-se quieto e evitar mudanças no forro ajudará. Aqui, o teste comportamental é realizado 24 horas após a injeção final de um regime de sete dias de injeções de MPTP ou soro fisiológico e 40 minutos após a administração intragástrica do L-DOPA a um subconjunto dos animais.
Se os testes comportamentais não forem realizados na mesma sala onde os animais estão alojados, aclimatar os ratos à nova sala por 30 a 60 minutos antes do teste. Comece colocando um cilindro de vidro transparente no centro de uma mesa. Cerque o cilindro em três lados com papelão preto, colocado de quatro a oito centímetros de distância do cilindro para reduzir o efeito da iluminação ambiental.
Deixe um lado do cilindro voltado para a câmera para gravação de vídeo. Conecte uma câmera capaz de pelo menos um milhão de pixels de resolução de 40 a 60 centímetros de distância do cilindro para garantir que todo o cilindro esteja contido no campo de visão. Coloque um rato no cilindro de cada vez e comece a filmar de uma vez.
Durante este processo tente evitar alterações de ruído ou luz, a fim de evitar influenciar o comportamento do mouse. As elevações das patas ocorrem quando o rato se levanta sobre seus membros traseiros, levanta os dois membros dianteiros acima do nível do ombro e pousa. Pare de filmar depois de três minutos e coloque o rato de volta na gaiola.
Limpe o cilindro com água e depois pulverize 70% de etnol sobre a parede interna para higienizá-lo e remover os cheiros do rato. Limpe o cilindro antes de testar o próximo mouse. Uma vez concluído o teste, reprodumente o vídeo a uma taxa de 0,5 vezes a velocidade regular e conte o número de elevações de patas contra a parede de cada mouse.
Se o mouse levantar seus membros dianteiros acima do nível do ombro várias vezes continuamente sem aterrissagem, ele deve ser contado apenas uma vez. Realize testes de campo aberto durante a mesma sessão do teste do cilindro. Prepare uma caixa de reação de campo aberto transparente com uma placa de madeira, coberta por um pano preto ou branco contrastante, dependendo da cor do mouse.
Conserte uma câmera sobre o campo a uma altura de um metro. Ajuste a câmera para ter certeza de que a caixa de reação de campo aberto está bem no centro do vídeo. Coloque um mouse de teste na caixa e deixe o mouse se familiarizar com o ambiente por cerca de um minuto.
Grave um vídeo de cinco minutos usando a câmera conectada ao computador. Finalmente, limpe as fezes na caixa de reação do campo aberto, pulverize 70% de etanol na caixa e limpe-a. No teste do cilindro, observou-se diminuição do número de traseiras contra a parede em camundongos tratados com MPTP em comparação com camundongos tratados com soro fisiológico.
O aumento das traseiras foi observado nos camundongos tratados com MTPT, dado l-dopamina no dia do teste, em comparação com os camundongos tratados com MPTP que recebem soro fisiológico. Esta imagem mostra o traço de movimento representativo e a distribuição de tempo estático, tempo de caminhada e tempo de execução em ratos de controle não tratados com MPTP. Camundongos tratados com MTPT demonstraram menor velocidade de movimento, menor distância de movimento, maior tempo estático e menor tempo de execução do que camundongos tratados com soro fisiológico, demonstrando um déficit motor induzido pelo MTPT.
Os camundongos tratados com MPTP que recebem L-Dopamina apresentaram maior velocidade de movimento, maior distância de movimento, menor tempo estático e maior tempo de funcionamento do que os camundongos tratados apenas com MPTP, indicando que a L-Dopamina mitiga o déficit motor induzido pelo MPTP. Ao mudar os camundongos sendo testados limpe completamente a área e pulverize o etanol para eliminar o efeito do perfume dos antigos camundongos. Após este procedimento, outras medidas como o teste de caminhada do feixe, teste de polo podem ser realizadas.
Dados relacionados à capacidade de equilíbrio e capacidade motora podem ser obtidos através desses métodos. O MPTP é neurotóxico para camundongos e humanos e, portanto, precauções rigorosas devem ser tomadas para evitar a exposição. Epi extra, como uma máscara ou respirador deve ser usado.
