Então, esta é uma espectrometria de massa ambiente única, particularmente adequada para a análise de amostras biológicas, tanto in vitro quanto in vivo. Como isso não requer regularmente um pré-tratamento especial de amostras, como classificação celular, fracionamento e concentração, pode analisar uma amostra com perda mínima de componentes biológicos, especialmente aqueles que existem como quantidade muito pequena. Esta técnica permite analisar as matérias-primas diretamente em um minuto por espectrometria de massa.
A rapidez é desempresa na robustez do sistema, principais vantagens inerentes a essa técnica. Tudo que você tem que fazer é apenas para preparar sílica, 10 miligramas de amostras de tecidos, e 10 microliters de proliferação. E colocá-los em cartucho descartável.
Ele está definido para a máquina PESI-MS, e você terá o resultado em poucos minutos. Escolhendo o espectrômetro de massa apropriado, você pode anotar a identidade molecular. Para começar, recupere o fígado ou tecido renal do congelador.
Em uma placa de cortiça, corte a amostra de tecido para aproximadamente dois por dois milímetros usando um bisturi ou faca. Alternativamente, soque a amostra com o Trepan e corte o comprimento da coluna para dois milímetros. Se o tecido estiver contaminado com sangue, lave brevemente com soro fisco tamponado de fosfato gelado.
Coloque aproximadamente 10 miligramas da amostra cortada ou perfurada em um microtubo plástico e adicione 100 microliters de 50% de etanol. Use uma micropéstle para homogeneizar a amostra. Em seguida, com o pipetman, coloque 10 microliters do homogeneizar no poço do cartucho do espectrômetro de massa.
Coloque o cartucho na câmara de ionização do Espectrômetro de Massa de Ionização da Sonda Direta e instale a sonda de agulha de roubo inoxidável que será usada para a ionização da amostra. Feche firmemente a tampa da câmara para ativar automaticamente o dispositivo de segurança. Inicie o computador de bordo clicando no ícone de partida para analisar, usando os painéis na tela, aplique uma tensão de 2,3 quilovolts na agulha para gerar o eletrospray e certifique-se de que a frequência da agulha é de três hertz.
Aguarde 30 segundos para que a medição seja concluída. Depois de medir cada amostra, descarte o cartucho e a agulha em um descarte de risco biológico. Para analisar o espectro de massa, abra o software associado ao espectrômetro de massa.
Clique no arquivo L-C-D na janela do navegador de arquivo de dados do software. Escolhendo clicar em um único pico da janela de espectro de massa, e para representar automaticamente um E-I-C. Verifique o T-I-C e o E-I-C e clique no ícone de espectro médio para selecionar a janela de tempo para gerar o espectro de massa.
Exporte os dados de texto espectral em massa. Para analisar os fluidos corporais, elave até 10 microliters da amostra de soro e distribua-os em um microtubo de 1,5 mililitro. Adicione 190 microliters de 50% de etanol ao tubo, depois vórtice por dois minutos em temperatura ambiente.
Para eliminar todos os glóbulos vermelhos, centrifugar o líquido a 15.000 vezes G por um a cinco minutos a quatro graus Celsius. Transfira 10 microlitres do supernante para o poço do cartucho e proceda à medida no espectrômetro de massa como anteriormente. Este protocolo mostra a preparação amostral para PESI-MS em amostra sólida, amostra líquida e animal vivo.
O carcinoma de células renais humanas mostra picos característicos de lipídios neutros. Houve picos relativamente fortes nos espectros na proporção massa-carga de 900 do tecido carcinoma de células renais humanas que não foram identificados no tecido não canceroso circundante. Esses picos representam principalmente o glicerol triacyl.
Exemplo de dados adquiridos em tecidos hepáticos normais, retratou a lesão neoplásica de um paciente com hepatite crônica e cirrose hepática. O soro humano de três indivíduos foi analisado utilizando-se o PESI-MS, houve diferenças claras nos padrões espectrais entre os indivíduos. Para as alterações metabólicas em 5-FdU injetadas intravenosamente no vaso de cauda de um rato, a detecção muito rápida e sensível de 5-FdU com aduto de sódio foi alcançada no fígado in situ.
Como a profundidade da ponta da agulha do local do tecido, desempenha o papel mais importante na ionização que lê a aquisição de dados bem sucedida, certifique-se de seguir as instruções. Você pode identificar as espécies moleculares olhando para o banco de dados comercial. Esta é uma maneira de qualificar o mecanismo molecular da doença.
Muitos pesquisadores se interessaram pela aplicação dessa técnica para prever a prosperidade da doença e seu prognóstico. Especialmente usando biópsia ricket. Apenas certifique-se de não ser picado pela agulha da sonda.
Isso pode ser simplesmente evitado com um instrumento específico para remover a agulha da máquina.
