Quando uma empresa química quer colocar um novo produto químico ou outro material no mercado, eles precisam fornecer dados de uma série de testes de ecotoxicidade. O teste de algas é um dos três testes obrigatórios que precisam ser realizados. O teste de algas sofre do fato de que é bastante desafiador de executar.
Por essa razão, desenvolvemos a plataforma de testes LEVITATT. O LEVITATT usa luz LED para evitar problemas com a geração excessiva de calor. Além disso, garante um campo leve uniforme.
Ele tem um tamanho compacto, o que significa que você não precisa de muito espaço para realizar o teste de algas, mas, ao mesmo tempo, permite usar volume de amostra suficiente para realizar análise química e caracterização antes, durante e depois do teste. Isso é especialmente importante quando você testa nanomateriais. Este vídeo demonstrará o uso de LEVITATT para testes de toxicidade alga de nanomateriais e outras substâncias difíceis.
A demonstração consiste nos quatro passos seguintes. Primeiro, descreva os componentes do LEVITATT. O segundo passo é preparar a solução para a mídia de crescimento de algas.
E o terceiro passo é dar uma visão geral do procedimento de como realizar um teste de toxicidade de algas. O passo final é medir o aumento da biomassa de algas por fluorômetro. O LEVITATT pode ser colocado no armário de sala controlado pela temperatura.
Isso permite temperatura estável durante toda a exposição. A configuração é colocada em um agitador orbital para permitir a rotação das amostras durante o teste. O teste é realizado em frascos de cintilação de 20 mililitros contendo quatro mililitros de exposição.
Uma tampa de parafuso com um orifício perfurado permite a troca de CO2 com o ar durante a exposição. A fonte led é sanduíche entre duas folhas de plástico e localizada no centro de cada invólucro. A colocação cria um campo de luz homogêneo e minimiza o sombreamento entre as amostras.
Cada invólucro é montado com grampos e pode conter até cinco amostras. O tamanho compacto minimiza o espaço necessário para realizar o experimento. Para preparar as soluções de estoque, pese a quantidade apropriada de cada composto.
A solução de estoque consiste em vários sais vitais para o crescimento das algas. Quando a quantidade apropriada de sais foram pesados, eles são diluídos com água ultra-pura. As soluções de estoque são esterilizadas por filtragem ou autoclavagem.
Após a esterilização, as soluções de estoque podem ser armazenadas no escuro a quatro graus Celsius. Prepare uma série de concentrações de exposição. O fator entre as concentrações de exposição não deve exceder 3,2.
O volume apropriado de algas em crescimento exponencial é adicionado a cada concentração de teste. A densidade celular final deve ser de aproximadamente 10.000 células algas por mililitro. É fundamental que a pré cultura cresça exponencialmente para cumprir os critérios de validade do teste.
Os frascos de medição são misturados para permitir uma distribuição homogênea de algas e compostos antes da amostragem. As amostras são derramadas em béquers, e quatro mililitros são pipetados em frascos de cintilação de 20 mililitros. Os frascos de cintilação estão agora tampados.
Pipeta 0,4 mililitro de cada concentração. Adicione acetona de 1,6 mililitro para interromper a parede celular e solte a clorofila à fase líquida. Cada frasco de vidro está agora perto firmemente para evitar a evaporação de acetona durante o armazenamento.
Os frascos de cintilação tampados são agora distribuídos aleatoriamente no LEVITATT e incubados por 72 horas. Meça a intensidade da luz e a temperatura no início e no fim da incubação para garantir o cumprimento das diretrizes desejadas. A subperse amostral é feita no intervalo de 24 horas por pipetação de 0,4 mililitros de cada frasco de cintilação em frascos de vidro.
Adicione 1,6 milhão de acetona para interromper a parede celular e liberar a clorofila à fase líquida. Depois que a acetona for adicionada, aparar as tampas firmemente e deixe as amostras no escuro até a análise. Use um fluorômetro para quantificar a biomassa na amostra adquirida durante todo o período de teste.
As configurações no fluorômetro devem ser de 420 nanômetros como comprimento de onda de excitação e um comprimento de onda de emissão de 671 nanômetros. Cada amostra individual é medida três vezes, e os valores relativos são observados. Os valores relativos do fluorômetro são utilizados para calcular a taxa de crescimento que será usada para posterior tratamento de dados.
Use um software estatístico para encaixar uma curva de regressão não linear aos dados calculados da taxa de crescimento. Um exemplo de uma curva de regressão não linear pode ser um log-logístico de função viável. O intervalo de confiança associado de 95% é mostrado ao lado do ajuste do modelo.
Valores de concentração regularmente eficazes como 10, 20 e 50% ineficientes são usados para relatar o resultado de um teste de ecotoxicidade. Em conclusão, o LEVITATT fornece uma plataforma compacta para testes de toxicidade alga de produtos químicos regulares em conformidade com as diretrizes padronizadas internacionais. Além disso, a configuração fornece uma plataforma robusta para testes de substâncias difíceis que interferem na passagem da luz em direção à alga, como nanomateriais ou substâncias coloridas.
