Применение ультразвуковой и сдвиговой эластографии в крысиной модели НАЖБ НАЖБ/НАСГ

Резюме

Этот протокол описывает использование расширенной ультразвуковой техники для неинвазивного наблюдения и количественной оценки изменений ткани печени в моделях грызунов с неалкогольной жировой болезнью печени.

Аннотация

Неалкогольный стеатогепатит (НАСГ) является состоянием в спектре неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП), которая характеризуется накоплением жира в печени (стеатоз) и воспалением, приводящим к фиброзу. Доклинические модели, близко переименовывающие НАСГ/НАЖБП человека, имеют важное значение для разработки лекарств. В то время как биопсия печени в настоящее время является золотым стандартом для измерения прогрессирования и диагностики НАЖБП / НАСГ в клинике, в доклиническом пространстве для гистологического анализа для оценки стадии заболевания необходим либо сбор целых образцов печени в нескольких временных точках во время исследования, либо биопсия печени.

Проведение биопсии печени в середине исследования является инвазивной и трудоемкой процедурой, а сбор образцов печени для оценки уровня заболевания увеличивает количество исследовательских животных, необходимых для исследования. Таким образом, существует потребность в надежном, переводимом, неинвазивном биомаркере визуализации для обнаружения НАСГ/НАЖБД в этих доклинических моделях. Неинвазивные ультразвуковые изображения B-режима и эластография сдвиговых волн (SWE) могут использоваться для измерения стеатоза, а также фиброза печени. Чтобы оценить полезность SWE в доклинических моделях НАСГ для грызунов, животных поместили на диету с про-НАСГ и подвергли неинвазивной ультразвуковой визуализации B-мод и эластографии сдвиговых волн для измерения гепаторенального (ЧСС) индекса и эластичности печени, измеряя прогрессирование как накопления жира в печени, так и жесткости тканей, соответственно, в нескольких временных точках в течение данного исследования НАЖБП / НАСГ.

Индекс ЧС и показатели эластичности сравнивали с гистологическими маркерами стеатоза и фиброза. Результаты показали сильную корреляцию между индексом HR и процентом окрашивания Oil Red O (ORO), а также между эластичностью и окрашиванием печени Picro-Sirius Red (PSR). Сильная корреляция между классическими методами ex vivo и результатами визуализации in vivo свидетельствует о том, что эластография сдвиговых волн / ультразвуковая визуализация могут быть использованы для оценки фенотипа и прогрессирования заболевания в доклинической модели НАЖБП/НАСГ.

Введение

Неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) является метаболическим состоянием, характеризующимся чрезмерным накоплением жира в печени, и быстро становится ведущим заболеванием печени во всем мире с недавно зарегистрированной глобальной распространенностью 25%^1. Неалкогольный стеатогепатит (НАСГ) является более прогрессирующей стадией спектра НАЖБП, характеризующейся избытком жира печени с прогрессирующим повреждением клеток, воспалением и фиброзом. Эти недуги часто молчат, не обнаруживаются с помощью анализов крови или обычных осмотров, пока не произошло значительное повреждение печени пациента. В настоящее время золотым стандартом для диагно....

протокол

Все процедуры, связанные с животными, были рассмотрены и одобрены Институциональным комитетом pfizer по уходу за животными и их использованию (IACUC) и проведены в международном аккредитованном учреждении AAALAC (Оценка и аккредитация по уходу за лабораторными животными).

1. Индукция заболевания

1. Используйте самцов крыс Глиц-Хан (150-175 г; ~ 6-7 недель; всего 40 крыс), которые свободны от известных адвентивных патогенов крыс. Размещайте крыс парами в индивидуально вентилируемой камере с бумажным подстилкой (см. Таблицу материалов)и поддерживайте их при температуре 22 ± 1 °C, относительной влажности 40-70% при цикл....

Результаты

Одной из отличительных черт животных, которых кормят CDAHFD, является стеатоз. Накопление жира в печени изменяет эхогенные свойства ткани, которые можно количественно оценить, измерив яркость печени и нормализовав ее до яркости коры почек по изображению В-мода, сделанному в той же плоскос.......

Обсуждение

Ультразвуковая визуализация, включая SWE, может быть бесценным инструментом для продольной оценки стеатоза печени и жесткости в доклинических моделях НАЖБВ/НАСГ. В этой статье описываются подробные методологии получения высококачественного B-режима, а также SWE-изображений печени для и?.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Aixplorer	Supersonic Imagine		Shear Wave Elastography Instrument
Aixplorer SuperLinear SLH20-6 Transducer	Supersonic Imagine		Transducer for Shear Wave Elastography
Alpha-dri bedding			rat cages
Aperio AT2 scanner	Leica Biosystems		Digital Pathology Brightfield Scanner
Compac 6 Anesthesia System	VetEquip		Anesthesia Vaporizer and Delivery System. Any anesthesia delivery system can be used, however.
Manage Imager Database	Leica Biosystems		Digital Pathology
Mayer's Hematoxilin	Dako/Agilent		H&E Staining/Histology
Nair	Church & Dwight		Hair remover
Oil Red O solution	Poly Scientific		Lipid Staining/Histology
Picrosirius Red Stain (PSR)	Rowley Biochemical	F-357-2	Collagen Stain/Histology
Puralube Opthalmic ointment	Dechra Veterinary Product		Lubricatn to prevent eye dryness  during anesthesia
Tissue-Tek Prisma Plus	Sakura Finetek USA		Automated slide stainer
VISIOPHARM software	Visiopharm		Digital pathology software
	Research Diets	A06071309i	NASH inducing diet
	Purina	5053	Control animal chow
Wistar Han rats	Charles River Laboratories