В городе Виво Обнаружение сосудистой проницаемости в подчелюстной железе мыши

Резюме

В настоящем протоколе эндотелиальную барьерную функцию подчелюстной железы (SMG) оценивали путем введения различных молекулярно-взвешенных флуоресцентных индикаторов в угловые вены моделей испытуемых животных in vivo под двухфотонным лазерно-сканирующим микроскопом.

Аннотация

Слюна играет важную роль в здоровье полости рта и в целом. Интактная эндотелиальная барьерная функция кровеносных сосудов обеспечивает секрецию слюны, тогда как дисфункция эндотелиального барьера связана со многими нарушениями секрета слюнных желез. Настоящий протокол описывает метод обнаружения параклеточной проницаемости in vivo для оценки функции эндотелиальных плотных соединений (TJ) в подчелюстных железах мыши (SMG). Во-первых, флуоресцентно меченый декстранс с различной молекулярной массой (4 кДа, 40 кДа или 70 кДа) вводили в угловые вены мышей. После этого односторонний SMG был рассечен и зафиксирован в индивидуальном держателе под двухфотонным лазерным сканирующим микроскопом, а затем были получены изображения для кровеносных сосудов, ацинушек и протоков. Используя этот метод, в режиме реального времени контролировалась динамическая утечка индикаторов различного размера из кровеносных сосудов в базальные стороны ацину и даже через ацинарное эпителие в протоки для оценки изменения функции эндотелиального барьера в физиологических или патофизиологических условиях.

Введение

Различные слюнные железы вырабатывают слюну, которая в первую очередь выступает в качестве первой линии защиты от инфекций и помогает пищеварению, тем самым играя существенную роль в здоровье полости рта и в целом¹. Кровоснабжение имеет решающее значение для секреции слюнных желез, поскольку оно постоянно обеспечивает воду, электролиты и молекулы, которые образуют первичную слюну. Эндотелиальная барьерная функция, регулируемая комплексом плотного соединения (TJ), строго и деликатно ограничивает проникновение капилляров, которые хорошо проницаемы для воды, растворенных веществ, белков и даже клеток, движущихся из циркулирующих кровеносных сосудо....

протокол

Все экспериментальные процедуры были одобрены Комитетом по этике исследований на животных, Научным центром здравоохранения Пекинского университета, и соответствовали Руководству по уходу за лабораторными животными и их использованию (публикация NIH No 85-23, пересмотрена в 1996 году). Для настоящего исследования использовались самцы мышей дикого типа (WT) в возрастной группе 8-10 недель. Подопытных животных тщательно обрабатывали, чтобы свести к минимуму их боль и дискомфорт.

1. Процедуры для животных

1. Подготовьте и введите анестетики и индикаторы.
   1. Поддерживать стерильные условия на протяжении всего исследов....

Результаты

Следуя протоколу, односторонний SMG был прикреплен к изготовленному на заказ держателю, а железа хранилась как можно дальше от тела мыши, чтобы предотвратить дыхание от артефактов движения. Быстрое течение эритроцитов (черных точек) в кровеносных сосудах наблюдалось под микроскопом. По?.......

Обсуждение

Поддержание и регуляция эндотелиальной барьерной функции имеют важное значение для сосудистого гомеостаза. Эндотелиальные клетки и их межклеточные соединения играют решающую роль в поддержании и контроле целостности сосудов¹². Сдвиговая сила кровотока, факторы роста и в.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
2-photon microscope (TCS-SP8 DIVE)	Leica, Germany
4 kDa FITC-labeled dextran	Sigma Aldrich	46944
70 kDa rhodamine B-labeled dextran	Sigma Aldrich	R9379
Blunt tissue separation nickel	Bejinghuabo Company	NZW28
Depilatory cream	Veet
Disposable sterile syringe	Zhiyu Company		1 mL
Image J software	National Institutes of Health
Insulin syringe	Becton, Dickinson and Company	0253316	1 mL
Leica Application Suite X software	Leica Microsystems
Microtubes	Axygen	MCT-150-C	1.5 mL
Phosphate buffered saline 1x	Servicebio	G4207-500
Tissue scissors	Bejinghuabo Company	M286-05
Tribromoethanol	JITIAN Bio	JT0781