Для начала измельчите лекарственные вещества Феретима, Перипланета американская и Гирудо с помощью травяной мельницы. Просеивают лекарственный порошок через стандартные лекарственные сита No два и No четыре. Соберите порошок между двумя ситами, чтобы получить необходимый образец порошка.
Возьмите один грамм порошка в пластиковую центрифужную пробирку объемом 50 миллилитров. Добавьте 20 миллилитров 5% раствора трихлоруксусной кислоты и гомогенизируйте при 1 000 об/мин в течение одной минуты с помощью высокоскоростного дисперсионного гомогенизатора. После гомогенизации гомогенат центрифугируют при концентрации 1,717 G в течение пяти минут при комнатной температуре и фильтруют надосадочную жидкость через впитывающую стеклянную воронку, смоченную в вате, в мерную колбу объемом 50 миллилитров.
После повторения процесса экстракции дважды с 15 и 10 миллилитрами 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты соединить фильтраты и довести объем до 50 миллилитров 5%-ным раствором трихлоруксусной кислоты. Далее аккуратно добавьте два миллилитра раствора гидроксида натрия и 0,5 грамма твердого парафина во флаконы объемом 20 миллилитров. Затем поместите их в духовку при температуре 70 градусов Цельсия примерно на 30 минут.
Выньте флаконы и дайте им остыть до комнатной температуры, чтобы парафин затвердел. Для обработки свободного пространства образца добавьте два миллилитра каждого раствора для экстракции образца в затвердевшие флаконы, содержащие парафин. Нажмите на крышку и закройте флакон.
Поместите герметичные флаконы с головным пространством на GCMS для измерения. Для получения стандартной кривой отсасывают серию из двух миллилитров стандартного раствора триметиламина поверх затвердевшего слоя парафина. Поместите герметичные флаконы с свободным пространством на машину для измерения триметиламина.
Чтобы выполнить прецизионный тест, отсасывайте два миллилитра стандартного раствора триметиламина 0,1 микрограмма на миллилитр поверх затвердевшего слоя парафина. Проведите шесть параллельных испытаний в машине в соответствии с инструкциями производителя. Для эксперимента по скорости извлечения запекайте несколько партий образца порошка в печи до тех пор, пока триэтиламин не будет обнаружен в GCMS, как было показано ранее.
Затем возьмите каждый грамм запеченного в духовке мелкодисперсного порошка в отдельные пластиковые центрифужные пробирки объемом 50 миллилитров. Добавьте 50 микролитров стандартного раствора триметиламина во все пробирки и экстрагируйте 5% раствором трихлоруксусной кислоты, как показано выше. Установлено, что время удержания триметиламина составляет 2,3 минуты с резким пиком и отсутствием помех со стороны других примесей.
Образцы Pheretima, Periplaneta americana и Hirudo, подвергнутые испытаниям на восстановление с шипами путем сушки для снижения содержания триэтиламина в травах, показали среднюю скорость восстановления 84,49, 94,66 и 85,67% соответственно. Триэтиламин был обнаружен в девяти партиях трав с концентрацией от 13,23 до 271,63 миллиграмма на килограмм.
