Электропорация скелетных мышц in vivo Levator auris longus для изучения регенерации NMJ у мышей

Для начала убедитесь, что все инструменты для препарирования и рабочее пространство были автоклавированы и чисты. Положите на операционный стол мышь CF-1 под наркозом. Используйте шприц Гамильтона для подкожного введения 20 микролитров 2 миллиграмма на миллилитр гиалуронидазы в PBS.

Взвесьте мышь, чтобы определить приблизительную дозу мелоксикама, и поместите животное в пустую клетку для 30-минутного восстановления. После повторного обезболивания мыши сделайте 8-миллиметровый разрез над сагиттальным швом черепа. С помощью ножниц и щипцов аккуратно удалите жир и соединительную ткань под кожей, чтобы обнажить мышцу levator auris longus или LAL.

С помощью шприца Гамильтона введите 10 микролитров коммерчески добываемой ДНК в фасцию мышцы. Расположите два электрода с золотыми иглами на расстоянии 5 миллиметров друг от друга в параллельном выравнивании над мышечными волокнами, охватывая всю длину мышцы LAL. Теперь с помощью электрооператора подайте пять электрических импульсов с напряжением 100 вольт на сантиметр в течение 20 миллисекунд каждый с частотой 1 герц.

Микроскопическое исследование показало, что высокая доля мышечных волокон из ростральной части LAL была положительной для экспрессии тандемного димерного томата, подтверждая эффективный электропораторно-опосредованный перенос генов мышц LAL in vivo.