Для начала подготовьте гидрогелевые микросферы альгината цинка, кальция, меди и железа. Для испытания на антимикробную эффективность добавьте по 10 миллилитров каждого из двух бактериальных растворов в стерильную центрифужную пробирку объемом 15 миллилитров. Затем инкубируйте культуры с 0,5 миллилитрами гидрогелевых микросфер в шейкере постоянной температуры.
Разведите каждый бактериальный раствор, в 10 раз в пятикратном размере, стерильной водой. С помощью стерильных стеклянных шариков равномерно распределите 200 микролитров бактериального раствора на твердую среду LB. Поместите планшеты в инкубатор при температуре 37 градусов Цельсия на 12 часов, чтобы оценить образование колонии.
Добавьте один миллиграмм на миллилитр бычьего сывороточного альбумина или суспензии БСА, к 500 микролитрам каждой микросферы и инкубируйте в течение 24 часов. Добавьте каждый насыщенный образец к одному миллилитру PBS и перемешивайте в течение 15 минут при температуре 37 градусов Цельсия с непрерывным встряхиванием со скоростью 80 оборотов в минуту. После аликвотирования замените носитель на свежий в час, три, шесть, 12, 24, 36 и 48 часов.
Количественно оцените концентрацию белка надосадочной жидкости в определенное время. Добавьте подготовленные микросферы ALG в PBS, и инкубируйте их при температуре 37 градусов Цельсия в течение 24 часов. Получить цельную кровь от здоровых мышей в антикоагулянтных пробирках, содержащих цитрат натрия.
После вихревой центрифугирования пробирку центрифугировать в течение 15 минут со скоростью 1,500 оборотов в минуту для получения эритроцитов. После промывки клеток приготовьте 10%-ный раствор эритроцитов с PBS и добавьте 20 микролитров раствора клеток крови в экспериментальную и контрольную группы микросферы. Инкубируйте образцы при температуре 37 градусов Цельсия в течение четырех часов и центрифугируйте их при 1500 оборотах в минуту в течение 15 минут.
Отложив надосадочную жидкость в сторону, сфотографируйте эритроциты в каждой группе после гемолиза. Наконец, измерьте значения абсорбции надосадочной жидкости в каждой группе и рассчитайте скорость гемолиза с помощью формулы. Различные микросферы проявляли антибактериальную активность в отношении золотистого стафилококка и кишечной палочки с медью и цинком, микросфер ALG, проявляя сильнейшие антибактериальные свойства.
Анализ высвобождения лекарств показал, что скорость высвобождения микросферы железа была относительно выше, чем у трех других ионов. Оценка биосовместимости показала, что эритроциты в суспензии оставались неповрежденными при контакте с различными микросферами, что указывает на минимальный гемолиз микросфер.
