Культивирование экспансии и пассаж первичных эпителиальных клеток дыхательных путей мышей

Как только эпителиальные клетки мышиного трахеи образуют неповрежденный монослой с булыжным видом, аккуратно промойте клетки тремя миллилитрами предварительно подогретого PBS. Добавьте в блюдо три миллилитра раствора ферментативной диссоциации животного происхождения и выдерживайте при температуре 37 градусов Цельсия в течение пяти минут. Аккуратно пипеткой вытесните клетки и перенесите суспензию в три миллилитра животного раствора для ингибирования фермента животного происхождения.

Центрифугируйте клеточную суспензию при 400 G в течение пяти минут при четырех градусах Цельсия и повторно суспендируйте гранулу в одном миллилитре расширяющей среды. Подсчитайте жизнеспособные клетки с помощью трипанового синего и гемоцитометра. Пластина Р1 клеточной суспензии на 100-миллиметровой посуде, предварительно покрытой коллагеном крысиного хвоста.

Культивируйте клетки при температуре 37 градусов Цельсия с 5% углекислым газом.