Для начала вставьте хвост мыши в верхнее отверстие ограничительной трубки. Медленно втяните мышь в трубку и поместите вилку перед мышью, чтобы она не вырвалась. Чтобы сделать удерживающий рукав для мыши меньшего размера, разрежьте носовой конец конуса, чтобы нос мыши не был заблокирован и у него было достаточно места для дыхания.
Затем обрежьте заднюю часть конуса примерно по длине мышки. Поместите мышь в ограничитель трубки, как описано выше. Удерживая мышь за хвост, позвольте ей войти в конус.
Вставьте конус ограничителя в трубку. Убедитесь, что хвост мыши полностью выходит из задней части трубки, а у мыши есть место для дыхания внутри конуса. Закрепите пробку трубки непосредственно перед носовым отверстием конуса.
Наполните 15-миллилитровую коническую трубку теплой водой. Поместите ограничитель из трубки вместе с мышью внутри него на возвышенную платформу. Опустите хвост сдержанной мыши в теплую воду хотя бы на одну минуту, пока боковые вены не станут четко расширены и не станут видны.
Поместите незакрытый аденоассоциированный вирус (AAV), содержащий микроцентрифужную пробирку объемом 1,7 миллилитра, в штатив для пробирок. Доминирующей рукой вставьте иглу вертикально в трубку. Как только игла окажется внутри трубки, удерживайте трубку недоминирующей рукой.
Затем поднимите трубку и шприц одновременно на уровень глаз, следя за тем, чтобы игла не касалась стенки трубки. Упритесь обеими руками в стол и медленно втяните дозу в шприц. Выдавите пузырьки воздуха из шприца через одноразовую абсорбирующую салфетку.
Подержите инъекант в течение 40 секунд, чтобы он прогрелся. Убедившись, что хвостовые вены хорошо видны, снимите ограничитель трубки с приподнятой платформы и положите его прямо на стол. Расположите мышь в ограничителе ногами вниз для удобного обращения с хвостом.
Быстро протрите хвост марлей, чтобы он высох. Затем протрите хвост спиртовым тампоном, и снова высушите его сухой марлей. Поверните хвост примерно на 90 градусов влево или вправо так, чтобы одна из двух боковых жилок была обращена вверх.
Найдите подходящее место для инъекции в пределах средней трети хвоста. Удерживайте хвост недоминантной рукой с помощью большого и указательного пальцев непосредственно дистальнее места инъекции. Загните хвост на указательный палец так, чтобы место инъекции лежало ровно на указательном пальце.
Затем потяните хвост назад, чтобы растянуть его, и место укола будет полностью горизонтальным. Удерживайте шприц указательным и средним пальцами доминирующей руки по обе стороны от фланца цилиндра шприца, держа большой палец наготове у поршня. Положите обе руки на стол и положите иглу прямо на хвост и вену параллельно им скосом, направленным вверх.
Теперь надавите на иглу вниз и проведите ее вперед в вену, чтобы ввести раствор AAV в вену. После введения дозы медленно извлеките иглу и немедленно прижмите марлей в месте инъекции не менее чем на 10 секунд до остановки кровотечения. Гистологическая визуализация флуоресцентного репортерного белка после инъекции показала, что tdTomato диффузно экспрессировался по всей печени и квадрицепсам, что указывает на то, что AAV9 широко достигал и трансдуцировал различные области обеих тканей.
