Конфокальная визуализация для оценки лимфатического удаления бета-амилоида из мозга мыши после транскраниальной фотобиомодуляции

Для конфокальной визуализации сначала подсоедините 10-сантиметровый катетер к инсулиновой игле. С помощью шприца Гамильтона с иглой 29 калибра приготовьте пять микролитров флуоресцентного бета-амилоида для инфузии в катетер. После фиксации руки мыши подсоедините катетер через иглу к имплантированному хроническому катетеру.

Подключите катетер к микроинъектору и поместите мышь в индивидуальную коробку. Установите скорость инъекции на 0,1 микролитра в минуту в меню микроинъектора и нажмите кнопку «Пуск», чтобы ввести FA beta в правый боковой желудочек. После введения бета-версии FA проведите фотобиомодуляцию (PBM) с помощью светодиода в течение 61 минуты, следуя алгоритму.

Затем внутривенно вводят любой индикатор для маркировки сосудов головного мозга через хвост. После эвтаназии острыми прямыми ножницами сделайте небольшой поперечный разрез на коже вдоль трахеи, придерживая кожу прямым неострым пинцетом. Затем прямыми ножницами сделайте продольный разрез по всей длине шеи.

С помощью изогнутого пинцета возьмите слюнные железы и аккуратно отделите их от соединительной ткани. Поместите раневой ретрактор на открытый участок разреза и зафиксируйте его, чтобы отодвигать окружающие ткани. Используйте два изогнутых пинцета с обеих сторон шеи, чтобы осмотреть область между трахеей и клейдомастовидной мышцей.

Прямым пинцетом, имеющим тупые концы, снимите глубокий шейный лимфатический узел с каждой стороны и отрежьте его от соединительной ткани. Наконец, поместите узлы в чашку Петри с солевым раствором и накройте их горизонтально ориентированным покровным стеклом для выполнения конфокальной микроскопии. Световые дозы в 30 джоулей на квадратный сантиметр показали наиболее значимый эффект для стимулирования лимфатического удаления бета-ЖК из мозга бодрствующих взрослых самцов мышей.

Импульсная мода на 1050 нанометрах оказалась наиболее эффективной в улучшении удаления FA beta по сравнению с другими длинами волн и непрерывной модой на той же длине волны. 10-дневный курс транскраниального PBM во время NREM-сна значительно снизил уровни растворимых бета-ЖК у старых мышей, приведя их в соответствие с уровнями, обнаруженными у более молодых взрослых мышей. Этот эффект не наблюдался при применении лечения во время бодрствования.