Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы, связанные с развитием, лечением и диагностикой плевральной мезотелиомы человека. Основным преимуществом этой надежной доклинической ортотопической модели является то, что она повторяет прогрессирование и патологию заболевания человека в микроокноронии, близкой к те, которые находятся у пациентов с плевральной мезотелиомой. Таким образом, эта бесценная модель имеет большое значение и использование неинвазивной молекулярной визуализации позволяет продольного мониторинга в соответствии с тремя R концепции.
Перед началом подготовки анестезии системы и хирургической области в ламинарный капюшон потока путем распыления всех поверхностей с дезинфицирующим средством. Поместите микро-изолированные клетки SPF в дезинфицированный капюшон потока. Поместите грелку, раствор povidone-йода 30 калибровочный шприц Гамильтона, марлю и ватные тампоны хирургические инструменты и микропипюты и кончики в капоте ламинарного потока.
После того, как мышь правильно анестезированной подкожно вводить 0,05 миллиграммов на килограмм Бупринорфин для послеоперационного рельефа кастрюлю. Затем поместите мышь на правой стороне на верхней части грелки и очистить хирургическую область с раствором povidone-йода и сделать 5-миллиметровый разрез кожи. Очистить окружающий жир и мышцы тупыми ножницами, чтобы разоблачить ребра.
Гомогенизировать подвеску клетки и загрузить 50 микролитров в шприц Гамильтон убедившись, чтобы избежать пузырьков воздуха. Протрите иглу 70% алкоголя до каждой инъекции. Медленно вводите клетки в плевральной полости между шестым и седьмым ребрами, держа иглу под углом 30 градусов и два-три миллиметра под межреберными мышцами.
Держите иглу прямо под ребрами, чтобы избежать инъекций в легкие. Она должна быть видна через мышцы. Когда закончите, закройте рану тремя-четырьмя абсорбируемыми швами и храните мышь в разогретой среде, пока она не проснется.
При выполнении имплантации очень важно правильно распоставить иглу, чтобы ограничить глубину проникновения иглы. Используйте нагревательную камеру, или инфракрасную лампу, чтобы довоить мышей при 30 градусах по Цельсию в течение 30 минут до инъекции фтора-18 (FDG) С помощью калькулятора дозы подготовить от трех до четырех мегабеккерельных доз фтора-18 (FDG) в 150-200 микролитров солевого раствора в 1 миллилитровых инсулиновых шприцах. Убедитесь в том, чтобы записывать все времена радиоактивности измерения дозы инъекций, и ПЭТ-сканирования для того, чтобы вычислить стандартные значения поглощения или внедорожников.
Взвешивание мышей затем внутривенно вводить фтор-18 (FDG)После инъекции оставить мышей спать в теплых условиях в течение 45 минут. Затем загрузите мышей на кровать сканера передачи кровати к сканеру и подвергать животных КТ по центру легких. Переместив кровать в подсистему ПЭТ, вставьте приобретение через час после инъекции фтора-18 (FDG) в течение 15 минут.
Затем удалите мышей из камеры визуализации и дайте им восстановиться в клетке, удерживая их в области, посвященной радиоактивному распаду. До анализа изображений реконструируют КТ и ПЭТ-сканирование, как описано в рукописи. Калибруйте изображения, сканируя фантомный цилиндр и автоматически регистрируя сканирование в соответствии со встроенным программным решением.
Для анализа изображений загрузите данные КТ в качестве ссылки, нажав на значок открытых данных. Затем загрузите данные ПЭТ в качестве ввода, нажав на значок данных приложения. Отрегулируйте цветовую гамму так CT и ПЭТ, чтобы контрастировать изображения для визуального осмотра.
Выберите 3D-инструмент окупаемости из меню падения нажмите на добавить рентабельность инвестиций, и назовите легкие файла. Нажмите на алгоритмы сегментации и пороговые значения соседства, затем определите входные данные в качестве фона и изображения в качестве рефери. Введите мин и макс в соответствии с значениями плотности легких мыши.
Осмотрите 3D визуализированые легкие, нажав на значок VTK. Затем нажмите значок таблицы show и извлекайте громкость в сгенерированную таблицу. Для анализа фтора-18 (FDG) в опухолях преобразуют ПЭТ-изображения во внедорожник, выбирая арифметику из выпадают из меню.
Выберите масштабарную множественность, затем используйте NP один в качестве выбранного и установите беккерель на миллилитр для фактора SUV в качестве масштабарного. Наконец выберите 3D roi инструмент из выпадают меню и нажмите добавить рентабельность инвестиций и назвать файл опухолей. Нажмите на режим 3D краски и сферы беспрепятственно 2D только и настроить размер формы, чтобы окружить опухоли.
Нажмите на значок таблицы шоу и извлекайте максимальное значение SUV из сгенерированного стола. 3D визуализации от КТ дают обзор локализации опухоли MPM и позволяют вычислить объемы легких. Измерения объема легких значительно уменьшаются с течением времени после инъекции внутриплевральных опухолей.
ПЭТ-сканирование предоставляет ценную информацию о метаболическом состоянии опухолей MPM. Опухоли были различимы через две недели после прививки и флюор-18 (FDG)поглощение было количественно путем извлечения внедорожников, которые были положительно коррелируют с количеством дней после инъекции. Кроме того, объемы легких и флюор-18 (FDG) алчность коррелируют друг с другом с R квадратом 0,6, который поддерживает прочность этих измерений для мониторинга развития ортопедической опухоли MPM.
После этой процедуры другие методы, такие как гистология, иммуногистохимия, и цитометрия потока могут быть выполнены для того, чтобы ответить на ортобиологические вопросы, такие как состояние пролиферации и фенотипические характеристики опухолей и микроокноронации. В заключение, эти доклинические методы прокладывают путь для исследователей, чтобы изучить новую стратегию диагностики и лечения плевральной мезотелиомы. Кроме того, использование молекулярной визуализации требует быстрого перевода новых результатов в клинику.
