Очистка хроматина локуса гена с одной копией у Saccharomyces cerevisiae

Эукариотическое ядро очень переполнено многими биологическими процессами, происходящими одновременно. Цель нашего исследования состоит в том, чтобы понять, как все эти процессы координируются в наших геномах без серьезных происшествий, которые в противном случае привели бы к геномной нестабильности и заболеваниям человека. Этот протокол позволяет нам очистить конкретный локус генома в его нативном состоянии, что позволяет как композиционную, так и функциональную характеристику выделенного материала, например, измерять взаимодействия белковой ДНК.

Этот протокол обеспечивает огромный уровень обогащения целевого локуса, что позволяет преодолеть многие существующие ограничения локус-специфического выделения хроматина. Материал не был сшит. Это также позволяет проводить многие последующие функциональные анализы, такие как транскрипция in vitro или репликация in vitro.

Этот протокол позволил нам вырезать и очистить различные источники репликации из хромосом дрожжей, что позволило нам провести протеомный анализ и идентифицировать факторы взаимодействия хроматина нового происхождения и, следовательно, продвинуть область исследований репликации ДНК. Этот протокол позволяет проводить исследования репликации in vitro с использованием очищенного исходного материала для изучения состояний хроматина, модификаций гистонов и выполнения структурного анализа нативных нуклеосомных матриц из эндогенных хромосом, продвигая исследования хроматина.