مصقول وعززت ضعيفة، جمجمة نافذة على المدى الطويل التصوير من مخ الفأر

Summary

نقدم وسيلة لتشكيل نافذة التصوير في جمجمة الفأر الذي يمتد ملليمتر وغير مستقرة لشهور دون التهاب في الدماغ. هي مناسبة تماما هذه الطريقة لدراسات طولية من تدفق الدم، وديناميات الخلوية، وخلية / بنية الأوعية الدموية باستخدام ثنائي الفوتون المجهري.

Abstract

في الجسم الحي التصوير من وظيفة القشرية يتطلب الوصول البصري إلى الدماغ دون انقطاع للبيئة داخل الجمجمة. نقدم وسيلة لتشكيل الجمجمة مصقول وعززت ضعيفة (منافذ) نافذة في جمجمة الفأر الذي يمتد على عدة ملليمترات في القطر وغير مستقر لعدة أشهر. وضعفت الجمجمة من 10 الى 15 ميكرون في سمك مع اليد التي عقدت التدريبات لتحقيق وضوح بصري، ومن ثم مضافين مع الغراء cyanoacrylate وغطاء زجاجي على: 1) توفير صلابة، 2) منع إعادة نمو العظام و3) الحد من تشتت الضوء من المخالفات الموجودة على سطح العظم. منذ الجمجمة لم يتم اختراق، وتقلص إلى حد كبير أي التهاب يمكن أن تؤثر على عملية التي تجري دراستها. لا يمكن أن يتحقق أعماق التصوير لمدة تصل إلى 250 ميكرون تحت سطح القشرة باستخدام ثنائي الفوتون المجهري المسح الضوئي ليزر. هي مناسبة تماما هذه النافذة لدراسة الدماغ تدفق الدم ووظيفة الخلوية على حد سواء في الأعمال التحضيرية تخدير ومستيقظا. فإنه يوفر المزيد من البروتوكول الاختياريportunity للتلاعب نشاط الخلية باستخدام optogenetics أو لعرقلة تدفق الدم في الأوعية التي تستهدفها تشعيع تعميم الضيائية.

Protocol

1. التحضير لجراحة ^ط

1. تنظيف الأدوات الجراحية بواسطة sonicating في خليط من الحليب Maxizyme والجراحي في نظافة بالموجات فوق الصوتية. الأوتوكلاف الأدوات الجراحية قبل كل تجربة.
2. ضمان أن تكون جميع الكو?.......

Discussion

ثنائي الفوتون التصوير من خلال نافذة الموانئ يتطلب انتقال العدوى عن طريق العظام ضعيفة ودورا، والذي خفف من ضوء الليزر، ويضيف الانحرافات البصرية في أعماق أكبر ^8. لكن، على الرغم من هذا العائق، لا يمكن تحقيق أعماق التصوير يصل إلى 250 ميكرون تحت سطح حنوني مع الإثارة نا.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
وكيل	طريق التسليم	جرعة للماوس	مدة	ملاحظات	مصدر	المرجع المرجع
بنتوباربيتال (Nembutal)	الملكية الفكرية	90 ميكروغرام / غرام	15-60 دقيقة	ضيق هامش السلامة. العمل لمدة تصل إلى الجرعة المناسبة من التخدير ببطء. استكمال 10٪ من جرعة التحريض على النحو المطلوب.	036093؛ بتلر شين	7
الكيتامين (Ketaset) مختلطة مع زيلازين (Anased)	الملكية الفكرية	60 ميكروغرام / غرام (K) 10 ميكروغرام / ز (X) (المزيج في حقنة واحد)	20-30 دقيقة	وشارك في زيلازين حقن بوصفها ارتخاء العضلات والمسكنات. تكملة الكيتامين فقط في 50٪ من جرعة التحريض على النحو المطلوب.	(K) 010177، (X) 033198؛ بتلر شين	7
Isoflurane (Isothesia)	استنشاق	4٪ يعني تركيز السنخية (MAC) لتحريض، 1-2٪ لجنة الهدنة العسكرية للصيانة	4-6 ح.	المنصوص عليها في خليط من الأوكسجين 70٪ وأكسيد النيتروز بنسبة 30٪. التخدير لفترة طويلة يؤدي إلى إبطاء الانتعاش.	029403؛ بتلر شين	26

البند	شركة	CATALOG # / MODEL
Betadine	بتلر شين	6906950
البوبرينورفين (Buprenex)	بتلر شين	031919
فلوريسئين الفصيلة ديكستران (2)، نجمة داود الحمراء الوزن الجزيئي	سيغما	FD2000S
ايزوبروبيل	الصياد	AC42383-0010
Lactated محلول رينغر	بتلر شين	009846؛
يدوكائين حل، 2٪ (V / V)	بتلر شين	002468
ملحي	بتلر شين	009861
الجراحية الحليب	بتلر شين	014325
تكساس الأحمر دكستران، وزن جزيئي 70 كيلو دالتون	إينفيتروجن	D1864
Maxizyme	بتلر شين	035646
المستهلكات
كربيد نتوءات، 1/2 مم حجم رأس	أدوات العلم غرامة	19007-05
تطبيقها طرف Cottoned	فيشر العلمية	23-400-100
تغطية زجاج، لا. 0 سمك	توماس العلمية	6661B40
Cyanoacrylate الغراء	ND صناعات	31428 H04308
الغاز المنفضة	رومنسيه	N82E16848043429
قبضة مسحوق الاسمنت	DENTSPLY	675571
قبضة الأسمنت المذيبات	DENTSPLY	675572
حقنة الانسولين، 0.3 حجم مل مع إبرة قياس 29.5	بتلر شين	018384
الجوز والترباس لتأمين رأس	Digikey	الجوز، H723-ND؛ الترباس، R2-56X1/4-ND
البصريات مرهم	بتلر شين	039886
مشرط ريش	فيشر العلمية	12-460-448
براغي، والتنصت على الذات # 000	الجماعة الاسلامية موريس الشركة	FF000CE125
سيليكون مانع التسرب حوض السمك	Perfecto التصنيع	31001
القصدير مسحوق	ماما والمعادن	EQT-TINOX
معدات
زجاج الكاتب	فيشر العلمية	08-675
تشريح المجهر	كارل زايس	OPMI FC-1
تعمل بالطاقة الكهربائية الحفر	Foredom أو Osada	K.1020 (Foredom) أو EXL M40-(Osada)
الحلاقة الكهربائية	فاهل	سلسلة 8900
الملقط، لا دومون. 55	أدوات العلم غرامة	11255-20
وسادة ردود فعل منظم الحرارة	FHC	40-90-8 (الثرمستور المستقيم، 40-90-5D-02؛ حأكل وسادة، 40-90-2-07)
Isoflurane المرذاذ	Ohmeda	IsoTec4
نبض oximeter	ستار العلوم الحياتية	MouseOx
مفك البراغي، مصغر	العلية واد	26B09.01
التجسيمي إطار	Kopf الآلات	نموذج 900 (مع قناع التخدير الماوس وعدم تمزق القضبان الأذن)
مقص جراحي، نهاية كليل	أدوات العلم غرامة	14078-10
بالموجات فوق الصوتية الأنظف	فيشر العلمية	15-335-30