抛光和钢筋，颅骨变薄窗口，为长期的小鼠脑成像

Summary

我们提出了一个方法，形成一个横跨毫米，是没有大脑的炎症个月稳定在小鼠颅骨的影像窗口。这种方法非常适合于使用双光子显微镜的血液流通，细胞动力学，细胞/血管结构的纵向研究。

Abstract

在体内的皮质功能成像需要光纤接入无脑颅内环境的破坏。我们提出了一个方法，在小鼠颅骨，跨越直径几毫米个月的稳定形成抛光和钢筋颅骨变薄（端口）窗口。手举行演习，以实现光学清晰度头骨10至15微米的厚度变薄，然后覆盖氰基丙烯酸酯胶和玻璃盖：1）提供刚性，2）抑制骨的再生和3）减少光散射从骨表面上的违规行为。由于颅骨没有违反，任何可能会影响正在研究过程中的炎症，会大大减少。可以实现利用双光子激光扫描显微镜成像深度可达250微米以下的皮质表面。这个窗口非常适合研究脑血流和细胞的功能，在麻醉和清醒的准备。它进一步提供运portunity操纵细胞的活性，利用光遗传学或破坏由照射循环光敏剂的目标船只的血流量。

Protocol

1。准备手术， ^我

1. 清洁及手术Maxizyme超声波清洗机的牛奶混合物中超声分散的手术工具。高压灭菌之前，每个实验的外科手术工具。
2. 确保所有必要的试剂和耗材可用。表2中提供的试剂和耗材清单。试剂和耗材，在接触到暴露组织应该是无菌的，在可能的情况下。
3. 诱导麻醉。表1描述了适合生存研究的典型麻醉药。为缺乏脚趾掐反射的检查，以确保手术的麻醉平面。鼠.......

Discussion

通过一个端口“窗口中的双光子成像需要通过传输薄骨和硬脑膜，衰减激光和光学像差增加了更大的深度^8。然而，尽管这个缺点，成像深度可达250微米以下脑膜表面可以达到900 nm激发。大成像深度可能在原则上有可能与较长的激发波长^13。这种方法的主要优点是皮质炎症的情况下，可能存在短暂的涉及全开颅^14，15的方法。一个精心准备的端口窗口应显示血管生成或炎症没.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
代理人	交货路线	剂量为鼠标	时间	笔记	源	参考价
巴比妥（戊巴比妥）	知识产权	90微克/克	15-60分钟	狭窄的安全保证金。工作到适当的麻醉剂量缓慢。所需补编诱导剂量的10％。	036093;巴特勒施恩	7
氯胺酮（Ketaset）混二甲苯胺噻嗪（Anased）	知识产权	60微克/克（金） 10微克/ G（X）（混合在同一注射器）	20-30分钟	甲苯噻嗪联合注入作为肌肉松弛剂和止痛药。氯胺酮诱导剂量的50％只补充需要。	（金）010177（X）033198;巴特勒施恩	7
异氟醚（Isothesia）	吸入	4％，平均诱导肺泡浓度（MAC）; 1-2％的维修MAC	4-6小时。	提供70％氧气和30％的一氧化二氮的混合物。长时间麻醉导致的缓慢复苏。	029403;巴特勒施恩	26

项目	公司	目录＃/型号
优碘	巴特勒施恩	6906950
丁丙诺啡（Buprenex）	巴特勒施恩	031919
2 MDA分子量右旋糖酐，异硫氰酸荧光素	西格玛	FD2000S
异丙醇	费舍尔	AC42383-0010
乳酸林格氏液的解决方案	巴特勒施恩	009846;
利多卡因溶液，2％（V / V）	巴特勒施恩	002468
盐水	巴特勒施恩	009861
手术牛奶	巴特勒施恩	014325
德州红，70 kDa的分子量右旋糖酐	Invitrogen公司	D1864
maxizyme	巴特勒施恩	035646
一次性
硬质合金旋转锉，1/2毫米针尖大小	罚款科学工具	19007-05
棉田尖端喷头	Fisher Scientific则	23-400-100
覆盖玻璃，没有。 0厚度	托马斯科学	6661B40
氰基丙烯酸酯胶	ND工业	31428 H04308
煤气除尘器	新蛋	N82E16848043429
握水泥粉	登士柏	675571
握水泥溶剂	登士柏	675572
胰岛素注射器，0.3 mL体积29.5针头	巴特勒施恩	018384
螺母和螺栓，以确保头	digikey	螺母，H723-ND;螺栓，R2-56X1/4-ND
眼科软膏	巴特勒施恩	039886
手术刀片	Fisher Scientific则	12-460-448
螺钉，自攻＃000	姬·莫里斯公司	FF000CE125
硅水族馆密封胶	perfecto制造	31001
锡氧化物粉末	妈妈的矿物	殷拓，TINOX
设备
玻璃划线	Fisher Scientific则	08-675
解剖显微镜	卡尔·蔡司	OPMI-1的FC
电动钻	foredom或Osada	K.1020（Foredom）或EXL-M40的（Osada）
电剃刀	华尔	系列8900
钳，杜蒙没有。 55	罚款科学工具	11255-20
反馈调节热垫	金控	40-90-8（直肠热敏电阻40-90-5D-02，H吃垫，40-90-2-07）
异氟醚蒸发器	美达	IsoTec4
脉搏血氧仪	斯塔尔生命科学	MouseOx
螺丝刀，微型	阁楼韦德	26B09.01
立体框架	kopf仪器	型号900（鼠标麻醉面罩和非破裂耳酒吧）
手术剪，钝端	罚款科学工具	14078-10
超声波清洗机	Fisher Scientific则	15-335-30