מלוטשת מחוזק דליל, הגולגולת חלון הדמיה לטווח ארוך של מוח עכבר

Summary

אנו מציגים שיטה ליצירת חלון הדמיה בגולגולת העכבר החובקת מילימטרים והוא יציב במשך חודשים ללא דלקת של המוח. שיטה זו גם מתאים מחקרים ארוכי טווח של זרימת דם, דינמיקה סלולריים, ותא / מבנה כלי הדם באמצעות שני פוטונים במיקרוסקופ.

Abstract

In vivo הדמיה של תפקוד קליפת המוח דורש גישה אופטית למוח ללא הפרעה של הסביבה תוך גולגולתי. אנו מציגים שיטה ליצירת הגולגולת דליל מלוטשת מחוזק (יציאות) חלון בגולגולת העכבר החובקת כמה מילימטרים בקוטר והוא יציב במשך חודשים. הגולגולת הוא דליל עד 10 עד 15 מיקרומטר עובי עם יד שנערך תרגיל כדי להשיג בהירות אופטית, והוא מעולף ואז עם דבק cyanoacrylate וכוס כיסוי ל: 1) לספק קשיחות, 2) לעכב לצמיחה מחודשת העצם 3) להפחית את פיזור אור מ חריגות על פני העצם. מאז הגולגולת לא פרוץ, דלקת העלולה להשפיע על תהליך הנלמד מופחת במידה ניכרת. בעומק הדמיה של עד 250 מיקרומטר מתחת לפני השטח של קליפת המוח יכולה להיות מושגת באמצעות שני פוטונים מיקרוסקופיית לייזר. חלון זה הוא גם מתאים ללמוד זרימת הדם במוח ותפקוד הסלולר ההכנות הן הרדים ו ער. זה עוד יותר מציעה אופportunity לתמרן פעילות התא באמצעות optogenetics או לשבש את זרימת הדם בכלי ממוקדות על ידי הקרנה של מחזורי פוטוסנסיטייזרים.

Protocol

1. הכנות לקראת ניתוח ^אני

1. נקו את כלי הניתוח על ידי sonicating בתערובת של חלב Maxizyme וכירורגי של שואב קולי. החיטוי כלי ניתוח לפני כל ניסוי.
2. ודא שכל ריאגנטים הדרושים מתכלים זמינים. רשימה של ריאגנט.......

Discussion

שני פוטונים הדמיה דרך החלון בנמלי הים דורש שידור דרך העצם דליל ואת דורה, אשר פוחתת אור לייזר ומוסיף סטיות אופטיות בעומקים גדולים יותר ^8. עם זאת, למרות החיסרון הזה, במעמקי הדמיה עד 250 מיקרומטר מתחת לפני השטח pial ניתן להשיג עם עירור 900 ננומטר. בעומק הדמיה גדולים יותר ?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
סוכן	מסלול של משלוח	מינון של העכבר	משך	הערות	מקור	Ref Ref
Pentobarbital (נמבוטל)	ה-IP	90 מיקרוגרם / g	15-60 דקות	בטיחות צמצם את השוליים. לעבוד עד מינון נכון של הרדמה לאט. תוספת 10% במינון אינדוקציה כנדרש.	036093; באטלר שיין	7
קטמין (Ketaset) מעורבב עם Xylazine (Anased)	ה-IP	60 מיקרוגרם / g (K) 10 מיקרוגרם / g (x) (לערבב אותו במזרק)	20-30 דקות	Xylazine הוא שותף מוזרק כמו להרפיית שרירים כאבים. להשלים רק קטמין על 50% במינון אינדוקציה כנדרש.	(K) 010177, (X) 033,198; באטלר שיין	7
Isoflurane (Isothesia)	שאיפה	4% כלומר ריכוז מכתשיים (MAC) לזירוז; 1-2% MAC לצורך תחזוקה	4-6 שעות.	בתנאי בתערובת של חמצן 70% ו 30% תחמוצת החנקן. הרדמה ממושכת גורמת להאטת ההתאוששות.	029403; באטלר שיין	26

פריט	החברה	קטלוג # / דגם
בבטאדין	שיין באטלר	6906950
עצירות (Buprenex)	שיין באטלר	031919
Fluorescein isothiocyanate dextran, 2 משקל מולקולרי מד"א	סיגמא	FD2000S
איזופרופיל אלכוהול	דיג	AC42383-0010
לקטט רינגר של פתרון	שיין באטלר	009846;
לידוקאין פתרון, 2% (V / V)	שיין באטלר	002468
מלוח	שיין באטלר	009861
כירורגי חלב	שיין באטלר	014325
טקסס אדום dextran, משקל מולקולרי 70 kDa	Invitrogen	D1864
Maxizyme	שיין באטלר	035646
Disposables
קרביד הקוצים, גודל עצה 1/2 מ"מ	מדע כלים עדינים	19007-05
עצה applicators בצמר גפן	פישר סיינטיפיק	23-400-100
כיסוי זכוכית, לא. 0 עובי	תומאס מדעי	6661B40
Cyanoacrylate דבק	ND תעשיות	31428 H04308
גז מטלית	Newegg	N82E16848043429
המלט גריפ אבקת	Dentsply	675571
המלט גריפ ממס	Dentsply	675572
מזרק אינסולין, נפח 0.3 מ"ל עם מחט מד 29.5	שיין באטלר	018384
אגוז בורג כדי לאבטח את ראש	Digikey	אגוז, H723-ND, בורג, R2-56X1/4-ND
Opthalmic משחה	שיין באטלר	039886
להבי אזמל הניתוחים	פישר סיינטיפיק	12-460-448
ברגים, עצמית הקשה # 000	JI החברה מוריס	FF000CE125
סיליקון איטום האקווריום	פרפקטו ייצור	31001
אבקת תחמוצת בדיל	אמא של מינרלים	EQT-TINOX
ציוד
זכוכית סופר	פישר סיינטיפיק	08-675
לנתח מיקרוסקופ	Carl Zeiss	OPMI-1 FC
מקדח חשמלי המופעל	Foredom או Osada	K.1020 (Foredom) או EXL-M40 (Osada)
סכין גילוח חשמלית	וואהל	סדרה 8900
מלקחיים, Dumont לא. 55	מדע כלים עדינים	11255-20
החום מוסדר משוב כרית	Fhc	40-90-8 (thermistor פי הטבעת, 40-90-5D-02, Hלאכול כרית, 40-90-2-07)
Isoflurane מאדה	Ohmeda	IsoTec4
הדופק oximeter	סטאר מדעי החיים	MouseOx
מברג, בזעיר אנפין	גארט ווייד	26B09.01
Stereotaxic מסגרת	קופף מכשירים	דגם 900 (עם מסכת העכבר הרדמה שאינם הקרע מוטות אוזניים)
מספריים כירורגיות, סוף בוטה	מדע כלים עדינים	14078-10
Ultrasonic Cleaner	פישר סיינטיפיק	15-335-30