Fare Beyin Uzun vadeli Görüntüleme için Parlak ve Takviyeli inceltilmiş-kafatası Pencere

Summary

Biz milimetre yayılan ve beyin iltihabı olmadan ay dayanır farenin kafatasında bir görüntüleme penceresi oluşturmak için bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem de iki foton mikroskopi kullanılarak kan akımı, hücresel dinamiği ve hücre / vasküler yapının uzunlamasına çalışmalar için uygundur.

Abstract

In vivo kortikal fonksiyon görüntüleme intrakraniyal çevre aksamadan beyne optik erişim gerektirir. Biz, çapı birkaç milimetre yayılan ve ay dayanır farenin kafatasının bir cilalı ve güçlendirilmiş inceltilmiş kafatası (portlar) pencere oluşturmak için bir yöntem sunuyoruz. Kafatası optik netlik elde etmek için matkap tutulan bir el kalınlığının 10 ila 15 um ile inceltilir ve daha sonra siyanoakrilat yapıştırıcı ve bir cam kapak ile kaplanır: 1) sertlik, 2) sağlamak kemik yeniden büyüme inhibe ve 3) ışık saçılımı azaltmak kemik yüzeyine düzensizlikler den. Kafatası ihlal olmadığı için, çalışılan süreci etkileyecek herhangi bir inflamasyon büyük ölçüde azalır. Kadar kortikal yüzeyinin altında 250 um arasında görüntüleme derinlikleri iki-fotonlu lazer tarama mikroskobu kullanılarak elde edilebilir. Bu pencere de anestezisiz ve uyanık hem hazırlıklarına serebral kan akımı ve hücre fonksiyonu incelemek için uygundur. Daha da op sunuyorportunity optogenetics kullanarak hücre aktivitesi işlemek için veya ışığa dolaşan ışınlama tarafından hedef damarlarındaki kan akımını bozabilir.

Protocol

1. Ameliyat için hazırlık ⁱ

1. Ultrasonik temizleyici Maxizyme ve Cerrahi Süt karışımı içinde sonicating tarafından cerrahi aletler temizleyin. Her deneyden önce cerrahi aletler otoklav.
2. Gerekli tüm reaktifler ve sarf kullanılabilir olduğundan emin olun. Reaktifler ve tek kullanımlık bir listesi Tablo 2'de verilmektedir. Mümkün olduğunda maruz doku ile temas Reaktifler ve sarf malzeme, steril olmalıdır.
3. Anestezi neden. Sağkalım çalışmaları için uygun.......

Discussion

İki foton A bağlantı noktası pencereden görüntüleme lazer ışığı zayıflar ve daha büyük derinliklerde ⁸ de optik sapmaları ekler inceltilerek kemik ve dura, üzerinden iletim gerektirir. Bununla birlikte, bu mahzur, rağmen, yukarı pial yüzeyinin altında 250 um ile görüntüleme derinlikleri 900 nm uyarma ile elde edilebilir. Büyükşehir görüntüleme derinliklerinde prensipte ¹³ daha uzun dalga boylarında uyarma ile mümkün olabilir. Bu yöntemin önemli bir avantajı tam k.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ajan	Doğum şekli	Fare için Doz	Süre	Notlar	Kaynak	Ref Ref
Pentobarbital (Nembutal)	IP	90 mg / g	15-60 dak	Dar güvenlik marjı. Yavaş yavaş anestezi uygun dozu kadar çalışın. Gerektiği gibi indüksiyon dozunun% 10 tamamlayın.	036.093; Butler Schein	7
Ketamin (Ketaset) Xylazine (Anased) ile karıştırılır	IP	60 mg / g (K) 10 mg / g (X) (aynı şırınga içinde mix)	20-30 dakika	Ksilazin bir kas gevşetici ve ağrı giderici olarak birlikte enjekte edilir. Gerektiği gibi indüksiyon dozunun% 50 sadece Ketamin tamamlayın.	(K) 010.177, (X) 033.198; Butler Schein	7
Izofluran (Isothesia)	Soluma	% 4 indüksiyon için alveoler konsantrasyon (MAC) anlamına gelir; bakım için% 1-2 MAC	4-6 saat.	% 70 oksijen ve% 30 nitrik oksit karışımı içinde sağlanan. Uzamış anestezi toparlanma yavaş olur.	029.403; Butler Schein	26

MADDE	ŞİRKET	KATALOG # / MODEL
Betadine	Butler Schein	6906950
Buprenorfin (Buprenex)	Butler Schein	031919
Floresein izotiosiyanat dekstran, 2 MDa moleküler ağırlığı	Sigma	FD2000S
İzopropil alkol	Balıkçı	AC42383-0010
Ringer Çözümü	Butler Schein	009.846;
Lidokain çözeltisi,% 2 (v / v)	Butler Schein	002468
Tuzlu	Butler Schein	009861
Cerrahi Süt	Butler Schein	014.325
Texas Red dekstran, 70 kDa molekül ağırlığı	Invitrogen	D1864
Maxizyme	Butler Schein	035646
SARF
Karbür çapak, 1/2 mm uç boyutu	Güzel Bilim Araçları	19007-05
Cottoned ucu aplikatörler	Fisher Scientific	23-400-100
Cam, hiçbir örtün. 0 kalınlığı	Thomas Bilimsel	6661B40
Cyanoacrylate yapıştırıcı	ND Sektörler	31.428 H04308
Gaz silgi	Newegg	N82E16848043429
Kavrama çimento tozu	Dentsply	675571
Kavrama çimento çözücü	Dentsply	675572
Insülin enjektörü, 29.5 iğne ile 0.3 mL hacim	Butler Schein	018384
Somun ve başını sabitlemek için vida	Digikey	Somun, H723-ND, cıvata, R2-56X1/4-ND
Oftalmoloji merhem	Butler Schein	039886
Bisturi bıçakları	Fisher Scientific	12-460-448
Vidalar, self-tapping # 000	JI Morris Şirketi	FF000CE125
Silikon akvaryum mastik	Perfecto İmalat	31001
Kalay oksit tozu	Mama Mineraller	EQT-TINOX
EKİPMAN
Cam scribe	Fisher Scientific	08-675
Mikroskop Kesme	Carl Zeiss	OPMI-1. FC
Elektrikli matkap	Foredom veya Osada	K.1020 (Foredom) veya EXL-M40 (Osada)
Elektrikli tıraş	Wahl	Serisi 8900
Forseps, Dumont yok. 55	Güzel Bilim Araçları	11255-20
Görüşleri düzenlenmiş ısı yastığı	FHC	40-90-8 (rektal Termistör, 40-90-5D-02; h) pad, 40-90-2-07 yemek
Izofluran vaporizer	Ohmeda	IsoTec4
Pulse oksimetre	Starr Yaşam Bilimleri	MouseOx
Minyatür, Tornavida	Garret Wade	26B09.01
Stereotaktik çerçeve	Kopf Aletleri	Model 900 (fare anestezi maskesi ve non-rüptürü kulak çubukları ile)
Cerrahi makas, kör uç	Güzel Bilim Araçları	14078-10
Ultrasonik temizleyici	Fisher Scientific	15-335-30