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Biology

RNA纯化的染色质隔离(CHIRP)

Published: March 25th, 2012

DOI:

10.3791/3912

Abstract

长非编码RNA的染色质状态的关键调节剂量补偿,压印和发育的基因表达1,2,3,4,5,6,7,如重要的生物过程。最近发现的成千上万的在特定的染色质修饰复合物,如多梳镇压复杂2(PRC2),的关联lnc​​RNAs与介导的组蛋白H3赖氨酸27三甲基化(H3K27me3),建议在管理中的特定基因的染色质状态的众多lncRNAs广泛的角色时尚8,9。虽然一些lncRNAs被认为在邻近基因的顺,其他lncRNAs工作的反式调节基因的远亲位于。例如, 果蝇 lncRNAs roX1和roX2绑定的雄性细胞的X染色体上的许多地区,是至关重要的剂量补偿10,11。然而,他们的结合位​​点的确切位置,不知道在高分辨率。同样,人类的lncRNA热风可以影响对H PRC2占用基因的全基因组3,12,13,但特异性是如何实现的undreds目前还不清楚。 LncRNAs也可以作为模块化脚手架,聘请多蛋白质复合物的组装。经典反义RNA支架是TERC的RNA,由于复杂的14端粒酶模板和脚手架;热风也可以作为一个PRC2脚手架和H3K4的去甲基复杂的13。

此前的研究显示映射在染色的RNA占用大量的见解15,16,但只有一次一个单一的基因位点。占用网站的大多数lncRNAs的是不知道,和染色质调控lncRNAs的角色大多已推断的lncRNA扰动的间接影响。正如染色质免疫芯片或深度测序(芯片的芯片或芯片SEQ,分别)大大改善了我们的基因组规模的蛋白质-DNA相互作用的理解,在这里我们说明了recenTLY出版策略映射在高分辨率17长的RNA入住的全基因组。基于这种方法,通过RNA纯化(CHIRP)( 图1),染色质隔离亲和力捕捉目标lncRNA:染色质复杂,由平铺反义寡核苷酸,然后生成基因组结合位点的地图,在几百基地的决议高灵敏度和低背景。 CHIRP是适用于许多lncRNAs因为亲和探针的设计是简单的RNA序列,并要求没有RNA的结构或功能域的知识。

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61 RNA lncRNA CHIRP

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