DNA断片の分離のためのアガロースゲル電気泳動

アガロースゲル電気泳動で100 bpから25キロバイト¹までさまざまなサイズのDNA断片を分離する最も効果的な方法です。アガロースは、海藻テングサ属とオゴノリから分離され、繰り返しagarobiose（L-およびD-ガラクトース）のサブユニット²から構成されています。ゲル化時には、アガロースポリマーは、非共有結合的に関連付け、孔径ゲルの分子ふるい特性を決定するバンドルのネットワークを形成しています。アガロースゲル電気泳動の使用は、DNAの分離に革命をもたらしました。アガロースゲルの採択に先立ち、DNAは、主にのみサイズの近似値を提供してショ糖密度勾配遠心法を用いて分離した。アガロースゲル電気泳動を使用して、別のDNAに、DNAは、ゲルと印加される電流にプレキャストウェルにロードされます。 DNA（およびRNA）分子のリン酸バックボーンは負電場に置かれたとき、したがって、充電され、DNA断片は、pに移行しますositivelyアノードを充電されます。 DNAが均一な質量/電荷比を持つため、DNA分子が移動する距離は、その分子量³のログに反比例するようなパターンで、アガロースゲル内のサイズで区切られています。アガロースゲルを介してDNAの動きのための主要なモデルは、リーディングエッジが前方に移動し^、4に沿って分子の残りの部分を引っ張ることにより、 "レプにバイアス"です。 2）アガロース濃度、3）DNAのコンフォメーション^5、4）臭化エチジウム、6の電圧が適用され、5）が存在する）タイプのDNA分子の1）サイズ：ゲルを介してDNA分子の移動速度は、次の要素によって決まりますアガロースおよび7）電気泳動用バッファーの。分離した後、DNA分子は、適切な染料で染色した後、UV光下で可視化することができる。このプロトコルに従うことによって、学生のことができるようになります。

1. DNA断片をゲルマトリックス内に分離されているメカニズムを理解する
2. のコンフォメーション方法を理解するDNA分子はゲルマトリックスを通じて、モビリティを決定します
3. 彼らのニーズに合わせて適切な濃度のアガロース溶液を識別する
4. DNAサンプルの電気泳動用アガロースゲルを準備します。
5. ゲル電気泳動装置と電源を設定する
6. DNA断片の分離に適した電圧を選択します。
7. エチジウムブロマイドはDNAバンドの可視化を可能にするメカニズムを理解する
8. 分離したDNA断片のサイズを決定